100 RUR bonus prve narudžbe
Odaberite vrstu rada Diplomski rad Terminski rad Sažetak Magistarski rad Izvješće o praksi Izvješće o članku Pregled Ispitni rad Monografija Rješavanje problema Poslovni plan Odgovori na pitanja Kreativni rad Eseji Crtanje Eseji Prevod Prezentacije Tipkanje Ostalo Povećanje jedinstvenosti teksta Doktorska disertacija Laboratorijski rad Pomoć on-line
Saznajte cijenu
Stafilokokoza u bolnicama 40-60%
Trenutno, rod Staphylococcus više ne pripada obitelji Micrococcaceae (od ranih 90-ih). Porodica Micrococcaceae ne postoji (budući da ne postoji genetski odnos između njenih komponenti). Ujedinili su se samo na temelju gram-pozitivnih aerobnih i fakultativnih anaerobnih koka, dijeleći se u nekoliko ravnina.
Micrococcus je genetski povezan s aktinomicetama.
Stafilokok je genetski povezan s klostridijom.
Prilikom istraživanja fuzobakterija, pravotella, bakteroida (strogi anaerobi) u okruženju bez kisika, ako ne koristite medij s antibioticima (aminoglikozidi), tada će stafilokoki (i enterobakterije) sve ubiti !!!
Način sjetve iscrpljenosti
Stafilokoki su fakultativni anaerobi. Micrococcus - strogi aerobi
Diferencijacija je test s aerobnom i anaerobnom razgradnjom glukoze. Sve Staphylococcus glukoza + još uvijek pod vazelinskim uljem. Micrococcus nije.
Staphylococcus - više od 30 vrsta, s podvrstama - 44. Razlikuju se s 33 testa.
Granica halotolerancije je okolina sa 7,5 i više% NaCl.
Micrococcus - i dalje raste za 6,5%, a samo Staphylococcus je veći. (LSA - 10% NaCl). Neke vrste su 15% NaCl.
Mliječno-solni agar - mikrokoki rastu, jer tamo ispod NaCl.
Buržoazija - Chapmanov medij - manitol-solni agar (1% manitola) - 7,5% NaCl. Manitol = manitol kao glicerol = glicerin
Ciljana izolacija stafilokoka (na primjer, tijekom sanitarnih i bakterioloških studija). Zona žutenja zbog stvaranja kiseline. Kao alternativu imamo - ZhSA.
Oni. ako izoliramo koke na mediju s ≥ 7,5 NaCl, tada su uvijek glukoza +, jer to je Staphylococcus i Micrococcus ne raste
Morfologija mikrokoka malo se razlikuje od stafilokoka - i kolonije i stanice veći nego u stafilokoka.
Svaka osoba ima 7-10 vrsta mikrokoka na koži (a ima ih ukupno oko 15 vrsta), prevladava M. luteus - velike žute kolonije na neinhibitornim podlogama (stari naziv je zračni sarcini, pravi sarcini ne rastu u aerobni uvjeti !!!). Ravnomjerno su obojene prema Gramu. U obliku hrpa, bilježnica, paketa. Drugi su bijeli, bezbojni itd. M.livi - emajl bijela. M.cristi - crvene kolonije.
Staphylococcus aureus prema Gramu neravnomjerno se boji (boja chintz). Grozdovi - često proizvodi S. aureus, kao i hrpe, bilježnice, paketi itd. Stafilokoki s tekućim stablima - pojedinačni, parovi, hrpe.
Na podlozi bez žumanjka pigment S. aureus se ne stvara i kolonije su sive.
Karotenoidi se ne otapaju u vodi i okolina oko kolonije nikada se ne mrlje u Staphylococcus i Micrococcus.
Angelina Hess - uvela agar u srijede sredinom 19. stoljeća
Micrococcus je također UPMF – sepsa. In vitro je osjetljiv na sve. Kod životinja penicilin - 5 jedinica po injekciji - na razini izuma penicilina - liječi sepsu. Ali in vivo liječenje je vrlo teško. Sepsa u bolesnika s operacijom srčane premosnice. Ako uđu u stroj srce-pluća.
Planococcus - nas ne zanima - nisu opasni u morskoj vodi i za ljude
Stomatococci - 1 vrsta. Dobro rastu na CA (sve raste na CA), ali ne rastu na slanim medijima. Oni nemaju poseban klinički značaj. UPMF. Vrlo rijetko uzrokuju gingivitis i stomatitis (ali češće te bolesti uzrokuju anaerobi i virusi).
S. aureus subsp. aureus
S. aureus subsp. anaerobni - ne raste u aerobnim uvjetima (strogo anaerobno)
Među stafilokokama nema saprofita - sve oportunistički... Više od 86 nosoloških oblika bolesti.
S. aureus i S. epidermidis - 45% svih stafilokokoza. Trovanje hranom – samo S. aureus (S. epidermidis – može izazvati samo u dojenčadi). Enterotoksine proizvodi samo S. aureus.
Svaka osoba ima 10-12 vrsta stafilokoka koji žive na koži.
Prednji dijelovi nosa su glavni biotop. Najviše je svega po jedinici površine.
S. epidermidis također može uzrokovati izbijanje bolničkih infekcija zajedno sa S. aureusom.
U novorođenčadi: konjunktivitis S. epidermidis ranije u Moskvi 70-ih godina; bolnička pneumonija S. epidermidis sada.
Plazmidi se prenose brzinom od oko 2 sata (2 sata stafilokok je bio na koži druge osobe i primio je novi plazmid).
Prijevoznik.
U porodničkim ustanovama ne provodi se rutinska studija na stafilokok (samo u slučaju izbijanja) - red 345. Kirurški profil do sada ima 720 narudžbi (ne izvodi se nigdje u svijetu). Broj stafilokoknih infekcija jednak je i kod "buržuja" i kod nas, bez obzira na sanitarne uslove.
Prema test sustavima može se razlikovati do 12-15 vrsta stafilokoka i nekoliko vrsta mikrokoka.
691 narudžba - ukinuta za rodilišta. Nova naredba 345 nema bakteriološki dio, stoga se u bakteriologiji svi još uvijek rukovode 691 nalogom.
Rutinski pregled na nosivost stafilokoka je otkazan.
Stafilokoka pozitivnih na koagulazu sada ima 5 vrsta.
|
koagulaze |
maltoza |
flokulacija |
Hemoliza na CA ljudskom krvlju |
||||
|
W/w dan |
Gotovo 100% |
||||||
|
± manje od 50% |
|||||||
|
W/W noć |
S. aureus ne daje koagulazu vrlo rijetko - s primarnim kulturama bolesnika s masivnom antibiotskom terapijom. Stoga smo ponovno zasijali na dovratnik, a zatim vratili plazmu. Ako nije, nije S. aureus.
Pigment na podlozi s visokim sadržajem proteina i laganim (YSA, medij sirutke s proteinom)
Među koagulazno negativnim stafilokokom, neki također mogu formirati pigment. S promagenes - tvori žuti pigment na bilo kojem mediju
Acetoin = acetilmetilkarbinol - VP (Voges-Proskauer) reakcija
Njegov medij s glukozom je polutekući. Kada se inokulira fiziološkom otopinom, uvijek pozitivno na glukozu, barem na vrhu stupca.
Konačan negativan odgovor na polutekući Hisov medij s glukozom daje se tek 5. dan.
Ako plin - pretpostavljamo da mješoviti ili uopće ne stafilokok.
Polutekući medij s manitolom isključen je 1974. - konačni negativan odgovor bio je tek 5. dan. Stavlja se samo na šalicu - odgovor ujutro.
Gusti medij s glicerinom (1%) (može se zamijeniti bilo kojim šećerom i alkoholom). Nikada se ne koriste tekući i polutekući mediji za diferencijaciju unutar rodova Staphylococcus i Micrococcus. Indikator - bromotimol plava, pH - neutralna; ili bromkrezol crvena, bromotimol crvena. Sijemo s plakovima - do 10 kultura po posudi. Radijalna pruga - do 6 kultura po posudi. Oko stafilokoka - žutilo. Mikrokok ne koristi glicerin.
S. aurecularis na test sustavima daje 95-99% sličnosti sa S. aureusom i samo se reakcijom koagulacije plazme može razlikovati.
Koagulaza negativni stafilokoki
Pod određenim uvjetima mogu proizvesti pigment.
Kod stafilokoka je nemoguće razlikovati vrste pomoću 1-2 testa.
Raste u plazmi u obliku manitola + pahuljica, svega 6-7 vrsta.
|
koagulaze |
Alkalne fosfataze |
trehaloza |
||||
|
Više od 20% sojeva |
||||||
|
5-10% sojeva |
||||||
|
95-100% sojeva |
||||||
|
5% sojeva |
||||||
|
S. saprophiticus |
5% sojeva |
100% S. aureus ima hemolitičku aktivnost.
S. saprophiticus je vrlo rijedak. Cistitis i uretritis kod mladih žena - osjetljivih na antibiotike i kemoterapiju
Koagulazno negativni ne mogu postati koagulazno pozitivni.
S. epidermidis nikada nije koagulazno pozitivan, što god da je napisano 720
Stanica bez spora može živjeti 10-12 dana.
Alkalna fosfataza je karakteristična samo za S. epidermidis.
Alkalna fosfataza - paranitrofenol fosfat ili fenolftalein fosfat iz ALP testova u biokemiji - 50 mg na 100 ml agara do 20 sojeva po ploči.
Para-nitrofenol fosfat → para-nitrofenol (žuta), a boja medija je limun žuta.
Fenolftalein fosfat → fenolftalein (bezbojan). Alkalizirajte 3-10% otopinom amonijaka (kapajte na poklopac čaše) Kolonije maline.
Možete kupiti 10% otopinu fenolftalein fosfata. Čuvano u hladnjaku godinama. 0,5 ml otopine na 100 ml agara.
S. epidermidis je prirodno osjetljiv na novobiocin.
Lecitovitelaza (faktor žumanjka) - ne koristi se u međunarodnoj klasifikaciji, samo ovdje.
20-25% S. epidermidis lecitinaza pozitivno.
80% S. aureus - ljudskog porijekla - daje lecitovitelazu. S. aureus negativan na lecitinazu - od životinja.
Mogu dati i drugi stafilokoki. Odnosno, ako je lecitovitelase +, onda je to 80% S. aureus, 20% ostali stafilokoki.
Luminalne ALCA čašice - zona čišćenja (proteaza) - nije nam važna.
Zamućenje – prevladavaju lipaze – također nisu važne.
Buržoaski krvni mediji - od eritrocita ovaca. Smatralo se da ljudski sojevi S. aureus proizvode samo α-hemotoksin, ali sada postoji i β-hemotoksin. To se može rastaviti samo na ovčjim eritrocitima.
β-hemotoksin daje zonu nepotpune hemolize za jedan dan, a ako ga zatim stavite u hladnjak do kraja radnog dana, tada će zona potpuno posvijetliti.
S. aureus proizvodi 2 enzima
1) termolabilna DNAza (nukleaza) – nalazi se u svim stafilokocima i u većini drugih mikroba.
2) Termostabilna DNaza (nukleaza) - dostupna samo u S. aureus. Neće se uništiti kuhanjem ili čak kratkotrajnim autoklaviranjem.
A prema našim naredbama određuje se samo termolabilna Dnaza (nema smisla).
U zagrijanoj hrani (kada je činjenica PTI skrivena), stafilokok se uništava, ali toksini ostaju. Prisutnošću termostabilne Dnaze može se utvrditi da li je S. aureus bila prisutna.
Po narudžbi visokopolimerizirane DNA 1-2 mg po 1 ml medija (pH = 8,0). Kultura plaka (ili injekcija). 24 sata. Razvijamo, ulijemo 3N HCl u čašu, formira se talog DNK s HCl, a tamo gdje je Dnaza proradila, vidimo zonu čišćenja. U S. aureus polumjer mu je 10-12 mm, u S. epidermidis polumjer mu je 4-5 mm. Oko rupe s ubijenom kulturom S. aureus - 7-8 mm.
S. epidermidis tvori samo termolabilnu DNazu, S. aureus - obje DNaze - zona je veća.
Stranica 38 od 91
PRIVATNA MEDICINSKA MIKROBIOLOGIJA
PATOGENI KOKI
Patogene koke koje uzrokuju bolesti kod ljudi različitih kliničkih manifestacija uključuju: 1) stafilokoke, 2) streptokoke, 3) pneumokoke, 4) meningokoke i 5) gonokoke.
Po tinktorijalnoj osobini (boji) mogu se podijeliti u dvije podskupine: gram-pozitivne koke (stafilokoke, streptokoke i pneumokoke), gram-negativne koke (meningokoke i gonokoke).
Karakteristična značajka svih patogenih koka je sposobnost izazivanja gnojnih upalnih procesa, zbog čega se nazivaju i piogeni (piogeni) koki.
Najoštrija i stalno piogena svojstva izražena su kod stafilokoka.
STAFILOKOKE
Morfologija i tinktorijalna svojstva. Stafilokoki - Staphylococcus (prvi put izoliran od Pasteura 1880.) imaju oblik pravilnih kuglica prosječnog promjera 0,8-0,9 mikrona. U razmazu iz čiste kulture stafilokoki su raspoređeni u hrpe i grozdove, nalik na grozd (slika 60.). U gnoju i drugom patološkom materijalu često se mogu pronaći pojedinačni koki, upareni, pa čak i kratki lanci. Dobro boje osnovnim anilinskim bojama, gram-pozitivne su, ne stvaraju spore, ne tvore kapsule i nepomične su.
Kulturna i biokemijska svojstva. Stafilokoki dobro rastu na konvencionalnim hranjivim podlogama i u prisutnosti i u odsutnosti slobodnog kisika. Optimalna temperatura 37°.
Riža. 60. Stafilokok (a) i streptokok (b) u čistoj kulturi.
Riža. 61. Kolonije stafilokoka na mesopatamia agaru. Uv. dvadeset.
Riža. 62. Sjetva ubrizgavanjem u želatinu.
Pojedinačne kolonije na površini agara su okrugli diskovi srednje veličine, konveksne, vlažne, neprozirne, homogene ili sitnozrnate strukture (vidi sliku 01). Boja kolonija ovisi o pigmentu koji proizvode stafilokoki i može biti zlatna (Staphylococcus aureus), limun žuta (Staphylococcus citreus) i bijela (Staphylococcus albus). Kada se prošara na kosom agaru, formira se obilan rast Staphylococcus aureus, pigmentiran.
Pigmenti Staphylococcus su lipokromi, netopivi u vodi i boje samo kulturu, a ne medij kulture. Formiranje pigmenta je intenzivno kada se mikroorganizmi uzgajaju u prisutnosti kisika, na sobnoj temperaturi, na svjetlu.
Kod sjetve s injekcijom u želatinu 2-3. dana rasta uočljiva je zona ukapljivanja na površini podloge. Kako se kultura ukapljuje, ona pada na dno u obliku pamučnog sedimenta (slika 62).
U bujonu, stafilokoki daju obilan rast. Nakon 24 sata u termostatu, juha postaje mutna, a na dnu epruvete nastaje talog.
Stafilokoki brzo zgrušaju mlijeko, dajući mu kiselu reakciju.
Fermentira (bez plina) laktozu, glukozu, maltozu, manitol. Sposobnost razgradnje manitola obično karakterizira patogene sojeve stafilokoka.
Patogeni stafilokoki na pločicama s krvnim agarom stvaraju kolonije okružene zonom hemolize i koaguliraju citriranu krvnu plazmu.
Otpornost. Staphylococcus aureus je jedan od vrlo postojanih mikroba. Temperatura od 80 ° ubija ga kada je mokar u roku od 10 minuta. Temperatura stafilokoka od 70 ° održava se do 1 sat. Karbolna kiselina (3-5% otopina) ih ubija u roku od 15-30 minuta. U gnoju staphylococcus aureus perzistira dugo vremena.
Toksini, enzimi stafilokoka, njihova patogenost za životinje. Patogeni stafilokoki proizvode niz toksina i enzima. Stafilokokni hemolihin otapa crvene krvne stanice. Ovaj toksin je termolabilan (razgrađuje se na 55°), spada u egzotoksine, a pri imunizaciji životinja njime se može dobiti antitoksin. Filtrat kultura stafilokoka također ima nekrotično i smrtonosno djelovanje. Sada je dokazano da su hemolizin, nekrotoksin i smrtonosni toksin sastavni dijelovi jednog egzotoksina stafilokoka. Ovi toksini su međusobno neodvojivi, a otkrivanje jednog od njih služi kao dokaz patogenosti izoliranog stafilokoka. Neki od hemolitičkih sojeva Staphylococcus aureus proizvode enterotoksin, koji uzrokuje akutni gastroenteritis. U filtratima stafilokoknih kultura često se nalazi leukocidin, otrov koji uništava leukocite. Patogeni stafilokoki se izoliraju iz enzima: 1) plazma koagul az y - zgrušavanje plazme, 2) fibrinolizin - otapanje fibrinskih ugrušaka, 3) hijaluronidaza - otapanje hijaluronske kiseline, tvari koja prianja na elemente vezivnog tkiva, 4) penicilinaza - in5) zona zamućenja penicilinaze oko kolonija na agaru sa žumanjkom (Chistovichov medij).
Od laboratorijskih životinja, na stafilokoke su najosjetljiviji zečevi i, u manjoj mjeri, zamorci i miševi. Kod kunića se kod intradermalne injekcije kulture javlja izražena nekroza, kod potkožnog ubrizgavanja razvijaju se apscesi, a infekcija visoko virulentnim sojevima stafilokoka dovodi do sepse i uginuća životinja. Mačići dojilja i mladi miševi najosjetljiviji su na stafilokokni enterotoksin.
Klasifikacija stafilokoka. Stara klasifikacija stafilokoka prema pigmentu koji luče (zlatna, bijela i limun žuta) ne omogućuje ispravno određivanje njihove patogenosti. Stoga se trenutno klasifikacija stafilokoka koju je predložio Gross smatra najispravnijom. Prema ovoj klasifikaciji, svi stafilokoki podijeljeni su u tri skupine: patogeni, slabo patogeni i nepatogeni.
Prva skupina - patogeni stafilokoki:
a) na pločama s 5% krvnim agarom formira se čista zona hemolize;
b) kada se kuniću daju intradermalno, izazivaju pojave izražene nekroze, ponekad završavaju smrću životinje;
c) proizvodi enzim plazmakoagulazu, koji uzrokuje koagulaciju plazme unutar 2 sata;
d) dodjeljuju se uglavnom od pacijenata sa sepsom ili akutnom gnojnom infekcijom.
Druga skupina su slabo patogeni stafilokoki:
a) na pločama krvnog agara formira se zona blage nepotpune hemolize;
b) kod intradermalne injekcije kunić uzrokuje crvenilo kože na mjestu uboda, ponekad infiltraciju, češće bez nekroze;
c) kada se inokuliraju u citratnu plazmu, uzrokuju zgrušavanje unutar 6 sati i kasnije;
d) luče se s površine kože tijekom folikulitisa, iz sluznice kod katara gornjih dišnih puteva, s površine rana, ali ne i iz njihove dubine.
Treća skupina su nepatogeni stafilokoki:
a) nije otkrivena hemoliza na pločama s krvnim agarom;
b) s intradermalnom primjenom kuniću, ne uočavaju se pojave nekroze i infiltracije, u nekim slučajevima pojavljuje se crvenilo kože;
c) reakcija koagulacije plazme je negativna;
d) nalaze se stalno na zdravoj koži, na sluznicama ždrijela, nosa i u zraku.
Patogeneza i bolesti u ljudi. Stafilokoki su vrlo česti mikrobi. Nalaze se u zraku, vodi i tlu, kod ljudi – gotovo stalno na koži i sluznicama. To objašnjava činjenicu da je staphylococcus aureus najčešći uzročnik svih vrsta gnojenja. Oštećenje kože i sluznice ili smanjenje njihove otpornosti otvaraju "vrata" za stafilokoknu infekciju.
Najčešće je zahvaćena koža. Stafilokoki su uzročnici čireva – gnojne upale folikula dlake. Ako čirevi postaju višestruki u prirodi, bolest se naziva furunkuloza. Kada se nekoliko čireva spoji, stvarajući opsežniji gnojni infiltrat, nastaje karbunkul.
Stafilokoki se nalaze u apscesima (apscesima), u gnojnim ranama, s katarom sluznice, septikemijom i septikopiemijom (sepsa s stvaranjem gnojnih žarišta u unutarnjim organima). Enterotoksični sojevi Staphylococcus aureus mogu uzrokovati trovanje hranom. Potonji se promatraju kao rezultat konzumacije mlijeka i drugih mliječnih proizvoda zaraženih stafilokokom, kolača s vrhnjem itd., jer u tim proizvodima stafilokok pronalazi optimalne uvjete za svoju reprodukciju. Patogeni stafilokoki mogu ući u mlijeko bilo od krava s mastitisom, ili iz ruku mljekarki koje pate od pioderme.
Imunitet. Ne postoji urođeni imunitet na stafilokok kod ljudi. Međutim, osoba ima značajnu otpornost na ovaj mikroorganizam, što se objašnjava zaštitnom ulogom kože i prisutnošću antitijela u krvi.
Očigledno se može dogoditi stečeni imunitet, o čemu svjedoči povećanje titra antitijela kod pacijenata i onih koji su se oporavili. Međutim, ovaj imunitet je nestabilan. Štoviše, zapaženo je da mnogi ljudi koji su imali furunkulozu imaju povećanu osjetljivost na stafilokok.
Otpornost na stafilokok može biti oslabljena zbog raznih razloga - dijabetesa, traume, iscrpljujućih bolesti itd.
Mikrobiološka dijagnostika. Studija gnoja. Najčešće je gnoj materijal za mikrobiološka istraživanja. U tu svrhu, kod otvorenih lezija, nakon prethodnog čišćenja površine rane sterilnim pamučnim štapićem, uklanja se iscjedak iz dubljih dijelova rane. U zatvorenim procesima (furuncle, apsces), u istu svrhu, nakon dezinfekcije kože, sterilnom štrcaljkom izvodi se punkcija žarišta suppurationa. Od nastalog gnoja izrađuju se razmazi, obojeni plavom i Gramom i mikroskopirani.
Prema položaju koka i tinktorijalnim svojstvima, teško je razlikovati stafilokoke i streptokoke, stoga se pristupa bakteriološkim istraživanjima, odnosno inokulaciji gnoja na pločice s jednostavnim krvnim agarom, na agaru od žumanjaka (vidi odjeljak " Sanitarna mikrobiologija", str. 454) i na mediju za obogaćivanje (šećerna juha). Posađene čaše, okrenute naopačke, i juha se stavljaju u termostat na 37 ° 1-2 dana.
Na pločama s krvnim agarom kolonije formiraju zone hemolize čiji je promjer često nekoliko puta veći od promjera kolonije. Ove prozirne bezbojne zone hemolize nastale su zbog otapanja crvenih krvnih stanica uzrokovanih stafilokoknim hemotoksinom. Na pločama s agarom od žumanjka i soli rastu patogeni stafilokoki s stvaranjem zlatnog pigmenta i zamućene zone - u obliku duginog vjenčića oko kolonije. Iz jedne kolonije se priprema pripravak, obojen po Gramu i mikroskopiran. Otkrivanje gram-pozitivnih koka u pripravku, koji se nalaze u obliku grozdova grožđa, daje pravo na izdavanje približnog pozitivnog rezultata. Zatim se ostatak kolonije subkulturi na agar kosi kako bi se dobila čista kultura. Potrebno je razlikovati patogeni stafilokok od nepatogenog, odnosno proučiti rast na krvnom agaru, žumanjčanom solnom agaru, sijati u nitratnu plazmu i odrediti toksičnost kod životinja.
Test koagulacije plazme. Za reakciju koagulacije plazme G.V. Vygodchikov preporučuje sljedeću tehniku. Iz srca kunića uzima se 10 ml krvi, stavlja se u epruvetu s 1 ml 5% otopine natrijevog citrata. Krv se centrifugira i plazma se aspirira. Dobivena plazma prije pokusa razrijedi se fiziološkom otopinom 1:4 i izlije u sterilne epruvete od 0,5 ml. Kolonije stafilokoka se inokuliraju petljom u epruvete s nitratnom zečjom plazmom, stavljaju se u termostat na 37° i provjerava se zgrušavanje plazme svaka 2-3 sata. Patogeni stafilokoki koaguliraju plazmu unutar 2-10 sati, najčešće unutar 4 sata.
Ispitivanje toksičnosti. Toksičnost stafilokoknih kultura određena je iskustvom na kunićima, a enterotoksina - na mačićima koji sišu. Suspenzija mikroba u fiziološkoj otopini priprema se iz kruga stafilokoka na kosom agaru i postavlja se prema optičkom standardu s izračunom 2 milijarde mikrobnih tijela u 1 ml suspenzije. Na boku ili stražnjoj strani kunića vuna se čupa i životinji se intradermalno ubrizgava 0,2 ml mikrobne suspenzije. Uz pozitivnu reakciju, na mjestu injekcije nastaje infiltrat, a zatim nekroza.
Da bi se otkrio smrtonosni toksin, zecu se intravenozno ubrizgava filtrat bujonske kulture stafilokoka u količini od 0,75 ml na 1 kg tjelesne težine. Smrt životinje nastupa za 15 minuta.
Za određivanje enterotoksina, mačići u dobi od 1,5-2 mjeseca (težine 400 g) se hrane izvornim kontaminiranim proizvodom ili mliječnom kulturom stafilokoka. Znakovi trovanja (proljev, ponekad i povraćanje) javljaju se unutar 30-60 minuta. Promatranje se provodi 4-6 sati, a ako za to vrijeme mačići nemaju reakciju, biološki test se smatra negativnim.
Krvni test. Ako bolesnik posumnja na sepsu, štrcaljkom se uzima 10 ml krvi iz ulnarne vene i inokulira u 100-200 ml šećerne juhe. Sjetva se stavlja na obogaćivanje na 24-48 sati u termostat. U pozitivnom slučaju medij postaje zamućen, a u razmazima iz njega nalaze se gram-pozitivne koke karakterističnog oblika i mjesta. Bujon se subkulturira u ploču s krvnim agarom i daljnja istraživanja se provode kako je gore opisano. Juha se drži u termostatu 10 dana, sjetvom na 5% krvni agar svaka 2 dana.
Istraživanje drugih materijala. Pri ispitivanju materijala kontaminiranih velikim brojem stranih mikroba (izmet, ispljuvak) preporuča se koristiti agar sa 7,5% natrijevog klorida u koji se dodaje 10% toplog obranog mlijeka (Petrovičev medij). Na takvom agaru značajno je potisnut rast strane mikroflore.
Tipizacija faga. Tipizacija faga koristi skup tipičnih stafilokoknih faga, koji se sastoji od 21 faga, podijeljenih u četiri skupine. Svaki tipični fag može se razmnožavati samo na odgovarajućem soju stafilokoka. Fagotipizacija stafilokoka je od posebne važnosti u
sanitarni i bakteriološki pregled prehrambenih proizvoda radi utvrđivanja izvora infekcije i utvrđivanja epidemioloških veza.
Specifična terapija i kemoterapija. Cjepivo protiv stafilokoka široko se koristi za liječenje ponavljajućih i kroničnih infekcija kao što je furunkuloza. Za prevenciju ovih bolesti koristi se toksoid.
U liječenju stafilokoknih infekcija koriste se i kemoterapijski lijekovi iz serije sulfonamida (norsulfazol, sulfodimezin i dr.), antibiotici (penicilin u velikim dozama, eritromicin, oksacilin i dr.), stafilokokni bakteriofag (za kožne lezije). U teškoj stafilokoknoj sepsi preporučuju se hiperimuna antistafilokokna plazma i gama globulin dobiveni od donora imuniziranih toksoidom.
Raširene stafilokokne infekcije, počevši od bolesti gornjih dišnih puteva, mogu napasti cijelo tijelo. Zbog dominantne lezije pojedinih organa, materijal za istraživanje stafilokoknih infekcija može biti ispljuvak, gnoj, krv, ispiranje nazofaringealnih lavaža, iscjedak iz mokraćnog sustava, hrana (uglavnom mliječni i konditorski proizvodi), ispiranje sa zaraženih površina, povraćanje, eksudati, odabran u strogom skladu s pravilima aspekta.
Pri analizi materijala koriste se mikroskopske, bakteriološke (izolacija čiste kulture mikroba i njihova identifikacija) i biološke metode.
I. MIKROSKOPSKA METODA
Mikroskopska metoda je od neovisne važnosti samo za aseptični rad s materijalima koji su sterilni u zdrave osobe (na primjer, krv, likvor). Otkrivanje stafilokoka u ovom slučaju ima neovisnu dijagnostičku vrijednost. U drugim slučajevima, mikroskopska metoda se koristi kao preliminarna, približna. Prilikom korištenja potrebno je obratiti pozornost na broj mikroorganizama u svakom vidnom polju (kod stafilokoknih bolesti patogen može istisnuti ostatak mikroflore i naći se u razmazima u ogromnim količinama), veličinu grozdova. (uz visoku patogenost, stafilokok je intenzivno podijeljen, pojedinci se nemaju vremena raspršiti i dati velike nakupine - grozdove), veličina pojedinačnih jedinki (patogeni stafilokoki su uglavnom vrlo mali).
II. BAKTERIOLOŠKA METODA
Bakteriološka metoda je izolacija čiste kulture patogena i njihova identifikacija.
Stafilokoki su među najčešćim mikroorganizmima. Ima ih i kod zdrave osobe. Stoga je za dijagnozu bolesti, utvrđivanje njene stafilokokne prirode, vrlo važno dokazati patogenost izolirane bakterije. Istodobno, rješavanje dijagnostičkog problema usko je povezano s razjašnjavanjem epidemiološke problematike, liječenja i prevencije ove infekcije. Na temelju toga, bakteriološka metoda se sastoji od nekoliko faza i smjerova.
Sve gore navedene faze studije prikazane su u dijagramu:
Izolaciju čiste kulture patogena treba provesti uzimajući u obzir njegove kulturne karakteristike halofilnosti (dobar razvoj u prisutnosti viška kuhinjske soli uz istovremeno suzbijanje druge mikroflore), veliku potrebu za proteinima i ugljikohidratima. To se postiže korištenjem elektivnih hranjivih medija koji istovremeno obavljaju funkcije diferencijalne dijagnostike.
SASTAV HRANLJIVOG MEDIJA ZA STAFILOKOKE
Prilikom provođenja analize potrebno je uzeti u obzir sljedeća odstupanja od tipičnih karakteristika stafilokoka.
ODREĐIVANJE OSNOVNIH POKAZAtelja VIRULENTNOSTI
Glavni pokazatelji virulencije stafilokoka su hemolitička aktivnost, proizvodnja enzima plazma koagulaze i nekrotoksičnost.
Prilikom procjene stupnja patogenosti kultura naširoko se koriste Grossovi testovi prema kojima se svi stafilokoki mogu podijeliti u tri skupine. U prvu skupinu nesumnjivo patogenih stafilokoka spadaju bakterije koje imaju (oštru hemolizacijsku aktivnost, zgrušavanje citratne plazme unutar 1-2 sata i izražena nekrotizirajuća svojstva. Druga skupina oportunističkih ili umjereno patogenih stafilokoka su pečati koji daju neznatnu hemolizu na agaru od 5% zečja ili janjeća krv, zgrušavanje plazme nakon 6 sati, a kod intradermalne primjene zecu izaziva crvenilo i infiltraciju. Treća skupina nepatogenih stafilokoka uključuje kulture koje ne hemoliziraju eritrocite, ne zgrušuju plazmu i nemaju nekrotizirajuća svojstva.
Dakle, procjena virulencije izoliranog stafilokoka temelji se na sveobuhvatnom testu tri pokazatelja patogenog učinka.
Istodobno, postoje službene naznake da kada se stafilokoki izoliraju iz proizvoda mliječne kiseline, osobito onih koji su dugo bili pohranjeni u hladnjaku, pojedinačni znakovi patogenosti mogu nestati uz zadržavanje sposobnosti stvaranja toksina u cjelini. Posljedično, stafilokoke kod kojih ispadne jedan od znakova patogenosti treba smatrati patogenima (Uputa Erisman Instituta iz 1967.).
ODREĐIVANJE HEMOTOKSINA provodi se izravnom inokulacijom kulture na MPA krvi koja sadrži 5-10% defibrinirane zečje ili janjeće krvi. Dodavanje ljudske krvi je nepoželjno, budući da stafilokoki koji luče alfa-hemolizin ne uništavaju ljudske eritrocite i stoga će prosudba o patogenosti ovog soja izoliranog od bolesne osobe biti nepouzdana.
Ponekad, kao rezultat varijabilnosti stafilokoka, kao i tijekom dugotrajnog skladištenja kultura u nepovoljnim uvjetima, hemolitička aktivnost potonjih je oslabljena ili potpuno nestaje. Kako bi se obnovila hemolizacijska sposobnost bakterija, preporučljivo je u medij na kojem se ispituje hemotoksičnost dodati redukcijsku smjesu u količini od 0,015 g na svakih 10 ml medija. Smjesa se sastoji od jednog dijela Na 2 SO 3 (natrijevog sulfata) i dva dijela Na HSO 3 (natrijevog bisulfata). Smjesa za rekonstituciju je pohranjena u mraku i dodana u rastopljeni medij ex tempore. Kako bi se očuvala hemolitičnost egzotoksina u kulturi stafilokoka, također se preporučuje u 100 ml kulture dodati 100 ml zasićene otopine Na 2 S 2 0 3 (reduktor) i 250 ml zasićene otopine hidrokinona (stabilizator). filtrat. VI Ioffe predlaže dodavanje samo 0,1 ml 1% otopine natrijevog sulfata Na 2 SO 3 na svakih 0,4 ml kako bi se obnovila hemolitička aktivnost.
ODREĐIVANJE PLAZMOKOAGULAZE provodi se inokulacijom kulture stafilokoka u uskoj epruveti s 0,5 ml 5% plazme zeca ili ljudskog citrata. Usjevi se stavljaju u termostat na 6-10 sati uz registraciju rezultata nakon 1, 2, 3 i 6 sati. Ljudska krvna plazma daje nedosljedne rezultate, a donorska plazma s glukozom i mertiolatom općenito nije prikladna. Ako je nemoguće zamijeniti ljudsku plazmu, ona se koristi tek nakon 10-strukog razrjeđivanja fiziološkom otopinom.
Uz klasičnu metodu za određivanje plazma koagulaze koristi se i reakcija koagulacije plazme na staklu ili ubrzani "slid test". Ova se metoda temelji na sposobnosti koagulazno aktivnih stafilokoka da se drže zajedno s krvnom plazmom i zgrušaju je. Koagulazno negativni sojevi ne posjeduju ovo svojstvo. Da biste izvršili reakciju, uzmite kap vode, suspendirajte ispitnu kulturu u njoj, a zatim dodajte jednu kap razrijeđene plazme zečje ili ljudske krvi. Nakon 15-60 sekundi nastaje plazma ugrušak. Kasnija (kasnije od minute) reakcija smatra se sumnjivom, a reakcija koja se dogodila nakon 3 minute smatra se negativnom.
ODREĐIVANJE NEKROTOKSINA provodi se intradermalnim ubrizgavanjem zecu 0,2 ml suspenzije od 2 milijarde dnevne agar kulture stafilokoka u fiziološkoj otopini. Promatranje životinje provodi se unutar 24-48 sati. Pozitivnom reakcijom smatra se samo infiltrat sa žućkastim središtem, tamnim rubom i svijetlocrvenim rubom duž periferije s naknadnim pojavama nekroze.
ODREĐIVANJE DODATNIH POKAZAtelja PATOGENOSTI STAFILOKOKA
ODREĐIVANJE ENZIMA HIJALURONIDAZE provodi se ispitivanjem kulture na supstratu koji sadrži hijaluronsku kiselinu. Kao potonje, koristi se ekstrakt iz pupkovine novorođenčeta. Za to se pupkovine u količini od 3-5 komada, sakupljene u 0,5% otopini karbolne kiseline, temeljito isperu iz krvi destiliranom vodom, očiste od krvnih žila, sitno nasjeckaju i dvaput prolaze kroz mlin za meso. Zatim se dobiveno mljeveno meso izvaže i prelije s jednim i pol volumena destilirane vode, nakon čega se ostavi na sobnoj temperaturi 30 minuta uz povremeno protresanje. Zatim se sva ta masa izlije u lijevak s 2-3 sloja sterilne gaze, filtrira, iscijedi, baci u kipuću vodu na minutu, kvantitativno odgovara početnoj težini zgnječenih užadi. Pustite da prokuha. Tekućina se brzo filtrira kroz dvostruki sloj sterilne gaze u sterilne epruvete i u svaku se dodaje nekoliko kapi kloroforma radi konzerviranja i supstrata. Zatim se tube zatvaraju pamučnim čepom i stavljaju na hladno da se sačuvaju. Ekstrakt ostaje gotovo nepromijenjen u ovim uvjetima nekoliko mjeseci.
Test hijaluronidaze provodi se u dvije faze. Prvi od njih je određivanje radne doze hijaluronske kiseline (pokus se izvodi samo jednom nakon pripreme ekstrakta i ponavlja se 1-2 puta mjesečno tijekom dugotrajnog skladištenja), drugi je detekcija hijaluronidaze. enzim.
| Shema za određivanje radne doze i titra hijaluronske kiseline | ||||||
| Reagensi | Epruvete i njihov sadržaj u ml | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| Ekstrakt hijaluronske kiseline | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 |
| Dijeta. vode ili nac. riješenje | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,4 |
| U termostat na +37°C 15 min. | ||||||
| 15% otopina octa. kiselina (indikator) | 2 do | 2 do | 2 do | 2 do | 2 do | 2 do |
| Rezultat (formiranje ugruška | - | + | + | + + | + + + | + + + + |
Epruvete se stave u termostat na 37 °C na 15 minuta, nakon čega se dodaju 2-3 kapi 15% otopine octene kiseline, lagano protresu i rezultati se očitaju stvaranjem ugruška. Titar hijaluronske kiseline smatra se njezinom minimalnom količinom, koja pod djelovanjem octene kiseline daje bistri ugrušak. U ovom primjeru titar hijaluronskog supstrata je 0,2 ml. Ista količina se uzima kao radna doza.
Sheme za određivanje aktivnosti hijaluronidaze kultura, vidjeti dolje.
Cijeli sadržaj epruveta se pomiješa, prvo se stavi u termostat na 15 minuta, zatim na hladno 5 minuta i doda se 2-3 kapi 15% octene kiseline. Prisutnost hijaluronidaze u bakterijama bilježi se odsutnošću ugruška u ispitivanom uzorku. U kontrolnoj epruveti trebao bi se pojaviti dobar ugrušak zbog prisutnosti netaknute hijaluronske kiseline.
Za točnije kvantitativno određivanje aktivnosti hijaluronidaze ispitne kulture, uzorak se stavlja prema sljedećoj detaljnoj shemi.
| Shema za određivanje aktivnosti hijaluronidaze kultura | ||
| Komponente | Epruvete | |
| 1 | 2 | |
| (glavni uzorak) | kontrola hijaluronidazne kiseline | |
| Ekstrakt hijaluronske kiseline u radnoj dozi (u ml) | 0,2 ml | 0,2 ml |
| Filtrat - enzim ili suspenzija od 2 milijarde mikroba u fiziološkoj otopini (u ml.) | 0,3 ml | - |
| Destilirano. vode ili nac. otopina (u ml.) | 0,2 | 0,5 ml |
| U termostatu na +37 °C 15-30 minuta, zatim na hladnom 5 minuta da se zaustavi djelovanje enzima | ||
| 15% otopina octene kiseline | 2 kapi | 2 kapi |
| Shema za kvantitativno određivanje aktivnosti hijaluronidaze | ||||||
| Komponente u ml | Epruvete | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| kontrola hijaluronske kiseline | ||||||
| Ekstrakt hijaluronske kiseline u rob. doza (u ml) | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Suspenzija bakterija 2 milijarde (u ml) | 0,5 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0,1 | - |
| Destilirano. vode ili nac. otopina u ml | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | 0,7 |
| Držite u termostatu, dodajte indikator 15% octene kiseline na hladno | ||||||
| Rezultat (formiranje ugruška) | - | - | - | + | + | + |
Titar aktivnosti hijaluronidaze kulture u ovom primjeru je 0,3 ml.
ODREĐIVANJE FIBRINOKINAZE temelji se na sposobnosti stafilokoka da lizira fibrinske ugruške svježe krvi. Za ispitivanje uzmite 0,5 ml dnevne bujonske kulture stafilokoka, dodajte u 0,2 ml svježe ljudske plazme ili krvi s 0,8 ml fiziološke otopine. Zatim lagano promiješati, nakon dodavanja 0,5 ml 0,25% otopine kalcijevog klorida. Kontrola u ovoj reakciji je epruveta sa svim istim komponentama, ali bez bakterija. Cijevi se stavljaju u termostat na 37°C. Koagulacija se javlja unutar prvih 15 minuta. Od ovog trenutka prati se napredak otapanja formiranog ugruška. Tipično, patogene kulture osiguravaju potpunu fibrinolizu unutar 24 sata.
DIFERENCIJACIJA USJEVA NA OKOLIŠ JE ČEPMEN. Priprema medija: 3,3 ml 0,1% vodene otopine gentian violeta ili kristal violeta doda se u 1 litru 3,5% MPA. Pripremljeni medij se izlije u čaše. Nakon stvrdnjavanja ima sivkasto-jorgovanu boju. Patogeni stafilokoki daju ljubičaste ili narančaste kolonije na njemu, nepatogene - bijele ili lila.
DIFERENCIJACIJA PATOGENOG STAFILOKOKA S OBZIROM NA MANITOL provodi se na tekućem Gyos mediju koji sadrži 0,5% polihidričnog alkohola - manitola. Manitol uništava patogene stafilokoke nakon 36 sati, a nepatogene znatno kasnije. Ovaj znak je vrlo nestabilan i nije neovisan pokazatelj patogenosti.
METODA UBRZANE BAKTERIOLOŠKE IZOLACIJE
I IDENTIFIKACIJA PATOGENOG STAFILOKOKA PO PETERU DANILU
Metoda se temelji na kombiniranoj uporabi konvencionalnog krvnog MPA s janjećim eritrocitima i medija s manitolom, natrijevim kloridom i kalijevim teluritom, za koji je recept razvio Petru Danila.
SREDNJI DO PETRO DANIL IMA SLJEDEĆI SASTAV: destilirana voda - 100 ml; pepton - 0,5 g; natrijev klorid -10 g; manitol ili laktoza, 0,5 g; kalijev telurit - 0,5 g; bromtimoblau - 0,004 g.
Priprema medija: otopiti pepton i sol u toploj vodi, dodati 2 ml otopine bromotimolbau (0,1 g na 3,2 ml N/20 otopine natrijevog hidroksida i 50 ml destilirane vode), sterilizirati na +120 °C 15 minuta. Nakon hlađenja dodati 5 ml 10% vodene otopine manitola ili laktoze, sterilizirane kuhanjem i 5 ml 1% vodene otopine natrijevog telurita, sterilizirane u autoklavu. Medij je tamnozelen, pH -7,6. Kada je boja plava, dodaje se u nju nekoliko kapi 10% klorovodične kiseline. Medij se ulije u epruvete, 1-2 ml.
Žutilo podloge Petru Danilu 24 sata nakon sjetve kulture i hemoliza oko kolonija stafilokoka ukazuju na oslobađanje patogenih bakterija.
UBRZANA SVJETOVITA IDENTIFIKACIJA PATOGENOG STAFILOKOKA PREMA PETERU DANILU
Diferencijacija patogenih stafilokoka provodi se u jednoj epruveti. Metoda se temelji na sposobnosti patogenih stafilokoka da aglutiniraju u prisutnosti ljudske plazme, koaguliraju je, a također uzrokuju aglutinaciju homolognih eritrocita. Za provođenje testa u 1 ml nitratne ljudske plazme doda se 10 ml fiziološke otopine i 0,05 ml eritrocitne mase taložene ispod plazme. Epruveta se protrese i 0,5 ml smjese se ulije u drugu epruvetu. Ovdje se unosi što je više moguće kulture stafilokoka, koji se pažljivo utrlja o stijenku epruvete blizu tekućeg supstrata, lagano dodirujući njegovu površinu. Trljanje se nastavlja sve dok se ne dobije homogena suspenzija. Patogeni staphylococcus aureus se aglutinira plazmom, a homogenizacija ne dolazi, nepatogena - tvori jednoličnu homogenu masu.
Patogeni stafilokoki, kada se kultura utrlja u supstrat plazme, tvore zrnastu nehomogenu suspenziju, a nakon inkubacije u termostatu izazivaju hemaglutinaciju eritrocita i koagulaciju plazme. U tom slučaju nepatogeni pečati tvore jednoličnu zamućenu suspenziju, a koagulacija plazme i adhezija eritrocita ne dolazi.
| Tab. 1. Vrste faga | |
| Skupina | Bakteriofagi |
| ja | 29, 52, 52A, 79, 80 |
| II | 3A, 3B, 36, 55, 71 |
| III | 6, 7, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A |
| IV | 42D |
| V | 81 i 187 |
FAGOTIPIRANJE STAFILOKOKA
Različiti tipovi stafilokoka faga cirkuliraju na različitim mjestima. Stoga je njihovo određivanje u stafilokoknim kulturama od velike važnosti za razjašnjavanje mogućeg izvora infekcije i načina njezina širenja.
Među plazma-koagulirajućim stafilokokom, prema nomenklaturi Međunarodnog odbora za fageotipizaciju, razlikuju se 22 vrste faga (tablica 1):
Određivanje lizabilnosti stafilokoka pomoću imenovanih bakteriofaga provodi se na sljedeći način.
PRIPREMA USJEVA ZA FAGOTIPIRANJE
FAGOTIPIRANJE
Pozitivnim se rezultatom smatra ako je stupanj lize određen s najmanje 2 plus boda. U ovom slučaju, zona lize je oko 50% površine na mjestu primjene bakteriofaga.
U mnogim slučajevima stafilokokne kulture liziraju se ne jednim, već nekoliko faga, tvoreći neku vrstu fagomozaika iz sterilnih mrlja. Stafilokoki koji pokazuju isti mozaik ili se razlikuju za 1 fag smatraju se identičnima.
BIOLOŠKA METODA
Biološka dijagnostička metoda koristi se samo ako postoji sumnja na intoksikaciju hranom uzrokovanu enterotropnim stafilokokom koji oslobađa enterotoksin. Njegov princip se svodi na hranjenje ostataka hrane sumnjive na infekciju stafilokokom, izoliranu kulturu, vodu za pranje. Najbolji biološki model su mačići stari 1,5-2 mjeseca (za istraživanje kulture) i odrasle mačke (ako se otkrije enterotoksin). Kod stafilokoknih infekcija kapanjem ova metoda se ne koristi.
Izvor: Motavkina N.S., Pyanova R.E. Mikrobiološka dijagnostika nekih kapljičnih infekcija i toksoplazmoze. Metodička izrada za učenike. VSMU, 1973. (monografija).
Staphylococcus aureus je 1878. otkrio R. Koch, a 1880. L. Pasteur u gnojnom materijalu. L. Pasteur, zarazivši zeca, konačno je dokazao ulogu stafilokoka kao uzročnika gnojne upale. Naziv "staphylococcus" dao je 1881. A. Ogston (zbog karakterističnog rasporeda stanica), a 1884. F. Rosenbach je detaljno opisao njegova svojstva. Stafilokoki su gram-pozitivne, pravilne geometrijske sferične stanice promjera 0,5 - 1,5 mikrona, obično smještene u obliku nakupina (vidi boju uklj., sl. 92), pozitivne na katalazu, reduciraju nitrate u nitrite, aktivno hidroliziraju proteine i masti, fermentiraju glukozu u anaerobnim uvjetima kako bi se stvorila kiselina bez plina. Obično mogu rasti u prisutnosti 15% NaCl i na 45°C. Sadržaj G + C u DNK je 30 - 39 mol%. Stafilokoki nemaju flagele, ne stvaraju spore. U prirodi su rasprostranjeni. Njihov glavni rezervoar je koža ljudi i životinja i njihove sluznice, komunicirajući s vanjskim okruženjem. Stafilokoki su fakultativni anaerobi, samo jedna vrsta ( Staphylococcus saccharolyticus) Strogi je anaerobik. Stafilokoki nisu zahtjevni za hranjive podloge, dobro rastu na običnim medijima, optimalna temperatura za rast je 35 - 37 ° C, pH 6,2 - 8,4. Kolonije su okrugle, promjera 2 - 4 mm, glatkih rubova, konveksne, neprozirne, obojene u boju nastalog pigmenta. Rast u tekućoj kulturi prati ujednačeno zamućenje, a tijekom vremena nastaje labav talog. Kada rastu na konvencionalnim podlogama, stafilokoki ne stvaraju kapsule, međutim, kada se ubrizgavaju u polutekući agar s plazmom ili serumom, većina sojeva S. aureus tvori kapsulu. Sojevi bez kapsula u polutekućem agaru rastu u obliku kompaktnih kolonija, sojevi u kapsulama - formiraju difuzne kolonije.
Stafilokoki imaju visoku biokemijsku aktivnost: fermentiraju s oslobađanjem kiseline (bez plina) glicerina, glukoze, maltoze, laktoze, saharoze, manitola; tvore različite enzime (plazma koagulaza, fibrinolizin, lecitinaza, lizozim, alkalna fosfataza, DNaza, hijaluronidaza, telurit reduktaza, proteinaza, želatinaza itd.). Ovi enzimi igraju važnu ulogu u metabolizmu stafilokoka i uvelike određuju njihovu patogenost. Enzimi kao što su fibrinolizin i hijaluronidaza odgovorni su za visoku invazivnost stafilokoka. Plazma koagulaza je glavni čimbenik njihove patogenosti: štiti od fagocitoze i pretvara protrombin u trombin, što uzrokuje koagulaciju fibrinogena, uslijed čega je svaka stanica prekrivena proteinskim filmom koji štiti od fagocita.
Klasifikacija. Rod Stafilokok uključuje više od 20 vrsta, koje su podijeljene u dvije skupine - koagulaza-pozitivne i koagulaza-negativne stafilokoke. Za razlikovanje vrsta koriste se različiti znakovi (tablica 22).
Tablica 22
Diferencijalni znakovi glavnih vrsta stafilokoka
Bilješka. (+) - pozitivan znak; (-) - predznak je negativan; + (-) - je prevrtljiv znak ;? - nepoznato.
I. Koagulaza-pozitivni stafilokoki:
1.S. aureus***.
2.S. intermedius**.
3.S. hyicusa.
II. Koagulazno negativni stafilokoki:
* Patogen samo za ljude.
** Patogeno samo za životinje.
*** Patogeno za ljude i životinje.
a Nisu svi sojevi S. hyicus imaju koagulazu.
Patogeni za ljude su uglavnom koagulaza-pozitivni stafilokoki, ali mnogi koagulaza-negativni stafilokoki su također sposobni uzrokovati bolesti, osobito u novorođenčadi (neonatalni konjunktivitis, endokarditis, sepsa, bolesti mokraćnog sustava, akutni gastroenteritis itd.). S. aureus ovisno o tome tko mu je glavni nositelj, dijeli se na 10 ekovara ( hominis, bovis, ovis i tako dalje.).
U stafilokoku je pronađeno više od 50 vrsta antigena, u tijelu se stvaraju protutijela na svaki od njih, mnogi od antigena imaju alergena svojstva. Prema specifičnosti, antigeni se dijele na generičke (zajedničke za cijeli rod Stafilokok); križna reakcija - antigeni zajednički s izoantigenima ljudskih eritrocita, kože i bubrega (s njima su povezane autoimune bolesti); vrste i tip-specifični antigeni. Prema tip-specifičnim antigenima otkrivenim u reakciji aglutinacije, stafilokoki su podijeljeni u više od 30 serovarijanti. Međutim, serološka metoda tipizacije stafilokoka još nije dobila široku primjenu. Specifične vrste uključuju protein A koji se formira S. aureus... Ovaj protein se nalazi površno, kovalentno je vezan za peptidoglikan, njegova molekularna težina je oko 42 kDa. Protein A se posebno aktivno sintetizira u logaritamskoj fazi rasta pri 41 °C, termolabilan je i ne uništava ga tripsin; njegovo jedinstveno svojstvo je sposobnost vezanja za Fc-fragment IgG imunoglobulina (IgG 1, IgG 2, IgG 4), u manjoj mjeri za IgM i IgA. Na površini proteina A identificirano je nekoliko regija koje se mogu vezati na regiju polipeptidnog lanca imunoglobulina smještenu na granici CH2 i CH3 domene. Ovo svojstvo našlo je široku primjenu u reakciji koaglutinacije: stafilokoki, napunjeni specifičnim antitijelima, u kojima aktivni centri ostaju slobodni, u interakciji s antigenom daju brzu reakciju aglutinacije.
Interakcija proteina A s imunoglobulinima dovodi do poremećaja u radu sustava komplementa i fagocita u tijelu bolesnika. Ima antigena svojstva, jak je alergen i inducira umnožavanje T i B limfocita. Njegova uloga u patogenezi stafilokoknih bolesti još nije u potpunosti razjašnjena.
Naprezanja S. aureus razlikuju se po osjetljivosti na stafilokokne fage. Za tipkanje S. aureus koristiti međunarodni skup od 23 umjerena faga, koji su podijeljeni u četiri skupine:
1. skupina - fagi 29, 52, 52A, 79, 80;
2. skupina - fagi 3A, 3C, 55, 71;
3. skupina - fagi 6, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A, 84, 85;
4. skupina - fagi 94, 95, 96;
izvan grupa - fag 81.
Odnos stafilokoka i faga je osebujan: jedan te isti soj može se lizirati ili jednim fagom, ili istovremeno s nekoliko. No budući da je njihova osjetljivost na fage relativno stabilan znak, fagotipizacija stafilokoka je od velikog epidemiološkog značaja. Nedostatak ove metode je što se ne može upisati više od 65 - 70%. S. aureus... Posljednjih godina dobiveni su setovi specifičnih faga za tipizaciju S. epidermidis.
Čimbenici patogenosti stafilokoka. Staphylococcus aureus je jedinstven mikroorganizam. Može uzrokovati više od 100 različitih bolesti koje pripadaju jedanaest klasa prema Međunarodnoj klasifikaciji iz 1968. Stafilokoki mogu zahvatiti bilo koje tkivo, bilo koji organ. Ovo svojstvo stafilokoka posljedica je prisutnosti velikog kompleksa patogenih čimbenika u njima.
1. Čimbenici adhezije - vezanje stafilokoka za stanice tkiva posljedica je njihove hidrofobnosti (što je veća, to su jača adhezivna svojstva), kao i adhezivnih svojstava polisaharida, moguće i proteina A, te sposobnosti vezanja. fibronektin (receptor nekih stanica).
2. Razni enzimi koji imaju ulogu faktora "agresije i obrane": plazma koagulaza (glavni faktor patogenosti), hijaluronidaza, fibrinolizin, DNaza, enzim sličan lizozimu, lecitinaza, fosfataza, proteinaza itd.
3. Kompleks izlučenih egzotoksina:
eritrociti, nekroza kod intradermalne primjene kuniću, uništenje leukocita, smrt kunića kada se primjenjuje intravenozno. Međutim, pokazalo se da je taj učinak uzrokovan istim čimbenikom - toksinom koji oštećuje membranu. Ima citolitički učinak na različite vrste stanica, što se očituje na sljedeći način. Molekule ovog toksina prvo se vežu na nepoznate receptore membrane ciljne stanice ili se nespecifično apsorbiraju lipidi sadržani u membrani, a zatim tvore heptamer gljive od 7 molekula, koji se sastoji od 3 domene. Domene koje tvore “kapu” i “rub” nalaze se na vanjskoj površini membrane, a domena “stabljike” služi kao transmembranski kanal pora. Preko njega dolazi do ulaska i izlaska malih molekula i iona, što dovodi do bubrenja i odumiranja stanica s jezgrom, te osmotske lize eritrocita. Pronađeno je nekoliko vrsta membrana oštećenih od ljudi, lizira eritrocite ljudi, zečeva i ovnova. Smrtonosni učinak kod kunića uzrokuje intravenska primjena nakon 3 - 5 minuta. Hemolizira eritrocite ljudi i mnogih životinjskih vrsta. Smrtonosni učinak na kunića pri intravenskoj primjeni uzrokuje nakon 16 - 24 - 48 sati. Vrlo često, kod stafilokoka, ob
b) eksfolijativni toksini A i B razlikuju se po antigenskim svojstvima, odnosu na temperaturu (A - termostabilan, B - termolabilan), lokalizaciji gena koji kontroliraju njihovu sintezu (A kontrolira kromosomski gen, B - plazmidni gen). Često u istom soju S. aureus sintetiziraju se oba pilinga. S tim toksinima je povezana i sposobnost stafilokoka da izazovu pemfigus u novorođenčadi, bulozni impetigo, grimizni osip;
c) pravi leukocidin - toksin koji se razlikuje od hemolizina po antigenskim svojstvima, selektivno djeluje na leukocite, uništavajući ih;
d) egzotoksin koji uzrokuje sindrom toksičnog šoka (TSS). Ima svojstva superantigena. TSS karakterizira porast temperature, pad krvnog tlaka, osip na koži s naknadnim ljuštenjem na rukama i nogama, limfocitopenija, ponekad proljev, oštećenje bubrega itd. Više od 50% sojeva sposobno je proizvoditi i lučiti ovaj toksin S. aureus.
4. Jaka alergena svojstva, koja posjeduju i komponente stanične strukture i egzotoksini i drugi otpadni produkti koje izlučuju bakterije. Stafilokokni alergeni su sposobni uzrokovati reakcije preosjetljivosti odgođenog tipa (HPR) i reakcije preosjetljivosti neposrednog tipa (HPN). Stafilokoki su glavni krivci za kožne i respiratorne alergije (dermatitis, bronhijalna astma i dr.). Posebnost patogeneze stafilokokne infekcije i njezina sklonost prijelazu u kronični oblik ukorijenjeni su u učinku GHZ-a.
5. Antigeni unakrsne reakcije (s izoantigenima eritrocita A i B, bubrezi i koža - indukcija autoantitijela, razvoj autoimunih bolesti).
6. Čimbenici koji inhibiraju fagocitozu. Njihova prisutnost može se očitovati u supresiji kemotaksije, zaštiti stanica od apsorpcije fagocitima, u davanju stafilokoka sposobnosti razmnožavanja u fagocitima i blokiranju "oksidativnog praska". Fagocitozu inhibiraju kapsula, protein A, peptidoglikan, teihoične kiseline, toksini. Osim toga, stafilokoki induciraju sintezu supresora fagocitne aktivnosti nekih stanica tijela (na primjer, splenocita). Inhibicija fagocitoze ne samo da sprječava tijelo da očisti stafilokoke, već i remeti procesiranje i prezentaciju antigena T- i B-limfocitima, što dovodi do smanjenja snage imunološkog odgovora.
Prisutnost kapsule u stafilokoku povećava njihovu virulentnost za bijele miševe, čini ih otpornima na djelovanje faga, ne dopušta tipizaciju s aglutinirajućim serumima i maskira protein A.
Teihoične kiseline ne samo da štite stafilokoke od fagocitoze, već, očito, igraju bitnu ulogu u patogenezi stafilokoknih infekcija. Utvrđeno je da se u djece s endokarditisom u 100% slučajeva nalaze antitijela na teihoinsku kiselinu.
7. Mitogeni učinak stafilokoka u odnosu na limfocite (ovaj učinak imaju protein A, enterotoksini i drugi produkti koje luče stafilokoki).
8. Enterotoksini A, B, C1, C2, C3, D, E. Karakteriziraju ih antigenska specifičnost, termička stabilnost, otpornost na djelovanje formalina (ne pretvaraju se u toksoid) i probavni enzimi (tripsin i pepsin), su stabilan u pH rasponu od 4, 5 do 10,0. Enterotoksini su proteini male molekularne mase s molekulskom težinom od 26 do 34 kDa sa svojstvima superantigena.
Također je utvrđeno da postoje genetski uvjetovane razlike u osjetljivosti na stafilokoknu infekciju i prirodi njezina tijeka u ljudi. Konkretno, teške stafilokokne gnojno-septičke bolesti češće se nalaze u osoba s krvnim grupama A i AB, rjeđe u osoba 0 i B skupine.
Sposobnost stafilokoka da izazovu trovanje hranom, kao što je intoksikacija, povezana je sa sintezom enterotoksina. Najčešće su uzrokovani enterotoksinima A i D. Mehanizam djelovanja ovih enterotoksina slabo je poznat, ali se razlikuje od djelovanja drugih bakterijskih enterotoksina koji remete funkciju sustava adenilat ciklaze. Sve vrste stafilokoknih enterotoksina uzrokuju sličan obrazac trovanja: mučnina, povraćanje, bol u gušterači, proljev, ponekad glavobolja, groznica, grč mišića. Ova svojstva stafilokoknih enterotoksina posljedica su njihovih superantigenskih svojstava: izazivaju prekomjernu sintezu interleukina-2, što uzrokuje intoksikaciju. Enterotoksini stimuliraju glatke mišiće crijeva i povećavaju gastrointestinalni motilitet. Trovanje je najčešće povezano s upotrebom mliječnih proizvoda zaraženih stafilokokom (sladoled, peciva, kolači, sir, svježi sir i dr.) i konzervirane hrane s maslacem. Infekcija mliječnih proizvoda može biti povezana s mastitisom kod krava ili s pioinflamatornim bolestima kod ljudi povezanih s proizvodnjom hrane.
Dakle, obilje različitih patogenih čimbenika u stafilokoku i njihova visoka alergena svojstva određuju osobitosti patogeneze stafilokoknih bolesti, njihovu prirodu, lokalizaciju, težinu tijeka i kliničke manifestacije. Avitaminoza, dijabetes, smanjeni imunitet doprinose razvoju stafilokoknih bolesti.
Otpornost na stafilokoke. Među bakterijama koje ne stvaraju spore, stafilokoki, poput mikobakterija, imaju najveću otpornost na vanjske čimbenike. Dobro podnose sušenje i ostaju održive i virulentne tjednima i mjesecima u suhoj finoj prašini, izvoru zaraze prašine. Izravna sunčeva svjetlost ih ubija samo na mnogo sati, dok difuzno svjetlo djeluje vrlo slabo. Također su otporni na visoke temperature: zagrijavanje do 80 ° C izdržavaju oko 30 minuta, suha toplina (110 ° C) ih ubija u roku od 2 sata; dobro podnose niske temperature. Osjetljivost na kemijska dezinficijensa jako varira, na primjer, 3% otopina fenola ih ubija u roku od 15 - 30 minuta, a 1% vodena otopina kloramina - za 2 - 5 minuta.
Značajke epidemiologije. Budući da su stafilokoki stalni stanovnici kože i sluznica, bolesti uzrokovane njima mogu biti ili autoinfekcije (s raznim ozljedama kože i sluznica, uključujući mikrotraume), ili egzogena infekcija uzrokovana kontaktnim kućanstvom, kapljicama u zraku, zrakom. prašinu ili alimentarne (za trovanje hranom) metode infekcije.
Prijenos patogenih stafilokoka je od posebne važnosti, jer nositelji, osobito u medicinskim ustanovama (razne kirurške klinike, rodilišta i dr.) iu zatvorenim skupinama, mogu uzrokovati stafilokokne infekcije. Nošenje patogenih stafilokoka može biti privremeno ili povremeno, ali osobe kod kojih je trajno (rezidentni nositelji) predstavljaju posebnu opasnost za druge. Kod takvih ljudi stafilokoki dugo i u velikom broju opstaju na sluznicama nosa i grla. Razlog dugotrajnog prijevoza nije sasvim jasan. Može biti posljedica slabljenja lokalnog imuniteta (nedostatak sekretornog IgA), disfunkcije sluznice, povećanja adhezivnih svojstava stafilokoka ili zbog nekog drugog svojstva.
Značajke patogeneze i kliničke slike. Stafilokoki lako ulaze u organizam i kroz najmanja oštećenja kože i sluznice te mogu uzrokovati razne bolesti – od juvenilnih akni (akni) do teškog peritonitisa, endokarditisa, sepse ili septikopiemije, kod kojih smrtnost doseže 80%. Stafilokoki uzrokuju čireve, hidradenitis, apscese, flegmon, osteomijelitis; u ratno vrijeme - česti krivci gnojnih komplikacija rana; stafilokoki imaju vodeću ulogu u gnojnoj kirurgiji. Posjedujući alergena svojstva, mogu uzrokovati psorijazu, hemoragični vaskulitis, erizipele, nespecifični poliartritis. Stafilokokna infekcija hrane čest je uzrok trovanja hranom. Stafilokoki su glavni krivci sepse, uključujući i novorođenčad. Za razliku od bakteremije (bakterije u krvi), koja je simptom bolesti i opažena je kod mnogih bakterijskih infekcija, sepsa (septikemija - truljenje) je samostalna bolest s određenom kliničkom slikom koja se temelji na oštećenju organa retikuloendotelni sustav (sustav mononuklearnih fagocita - SMF). Kod sepse postoji gnojni fokus, iz kojeg patogen povremeno ulazi u krvotok, širi se po cijelom tijelu i utječe na retikuloendotelni sustav (SMF), u čijim se stanicama umnožava, oslobađajući toksine i alergene. U ovom slučaju, klinička slika sepse slabo ovisi o vrsti patogena, ali je određena porazom određenih organa.
Septikopiemija je oblik sepse, u kojoj uzročnik uzrokuje gnojna žarišta u različitim organima i tkivima, odnosno sepsa je komplicirana gnojnim metastazama.
Bakterijemija u sepsi i septikopiemiji može biti kratkotrajna i dugotrajna.
Postinfektivni imunitet postoji, to je zbog humoralnih i staničnih čimbenika. Važnu ulogu u njemu imaju antitoksini, antimikrobna antitijela, antitijela protiv enzima, kao i T-limfociti i fagociti. Intenzitet i trajanje imuniteta na stafilokoke nisu dovoljno istraženi, jer je njihova antigenska struktura previše raznolika, a ne postoji unakrsna imunost.
Laboratorijska dijagnostika. Glavna metoda je bakteriološka; razvijene i implementirane serološke pretrage. Po potrebi (u slučaju intoksikacije) koristi se biološki uzorak. Materijal za bakteriološko ispitivanje je krv, gnoj, sluz iz grla, nosa, iscjedak iz rana, ispljuvak (kod stafilokokne pneumonije), izmet (kod stafilokoknog kolitisa), u slučaju trovanja hranom - povraćanje, izmet, ispiranje želuca, sumnjiva hrana . Materijal se inokulira na krvni agar (hemoliza), na mliječno-solni (mlijeko-žumanjak-sol) agar (naCl inhibira rast stranih bakterija, bolje se detektiraju pigment i lecitinaza). Izolirana kultura identificira se prema karakteristikama vrste, utvrđuje se prisutnost glavnih znakova i čimbenika patogenosti (zlatni pigment, fermentacija manitola, hemoliza, plazma koagulaza), provjerava se osjetljivost na antibiotike, ako je potrebno, provodi se tipizacija faga. Od seroloških reakcija, RPHA i IFM se koriste za dijagnosticiranje gnojno-septičkih bolesti, posebice za određivanje antitijela na teihoinsku kiselinu ili na antigene specifične za vrstu.
Za određivanje enterotoksigenosti stafilokoka koriste se tri metode:
1) serološki - uz pomoć specifičnih antitoksičnih seruma u reakciji precipitacije u gelu otkriva se enterotoksin i utvrđuje njegov tip;
2) biološka - intravenska primjena filtrata bujonske kulture stafilokoka mačkama u dozi od 2 - 3 ml po 1 kg tjelesne težine. Toksini izazivaju povraćanje i proljev kod mačaka;
3) neizravna bakteriološka metoda - izolacija čiste kulture stafilokoka iz sumnjivog proizvoda i određivanje čimbenika njegove patogenosti (formiranje enterotoksina korelira s prisutnošću drugih patogenih čimbenika, posebice RNAaze).
Najjednostavnija i najosjetljivija je serološka metoda za otkrivanje enterotoksina.
Liječenje. Za liječenje stafilokoknih bolesti uglavnom se koriste beta-laktamski antibiotici na koje prije svega treba odrediti osjetljivost. Kod teških i kroničnih stafilokoknih infekcija pozitivan učinak daje specifična terapija - primjena autovakcine, toksoida, antistafilokoknog imunoglobulina (ljudskog), antistafilokokne plazme.
Specifična profilaksa. Za stvaranje umjetne imunosti na stafilokoknu infekciju koristi se stafilokokni toksoid (tekući i u tabletama), ali stvara antitoksični imunitet samo protiv stafilokoka, koji se uglavnom lizira od strane I. skupine faga. Korištenje cjepiva od ubijenih stafilokoka ili njihovih antigena, iako dovodi do pojave antimikrobnih protutijela, ali samo protiv onih serovarijanti od kojih je cjepivo napravljeno. Problem pronalaženja visoko imunogenog cjepiva učinkovitog protiv mnogih vrsta patogenih stafilokoka jedan je od najvažnijih problema moderne mikrobiologije.
STYLAB nudi testne sustave za analizu sadržaja Staphylococcus aureus u hrani i okolišu mikrobiološkim metodama, kao i za određivanje DNK ove bakterije PCR-om.
Staphylococcus aureus ( Stafilokokaureus) je sveprisutna gram-pozitivna nepokretna fakultativno anaerobna bakterija koja ne tvori spore koja pripada koki - globularnim bakterijama. Ovaj mikroorganizam je dio normalne mikroflore kože i sluznica u 15-50% zdravih ljudi i životinja.
Neki sojevi ove bakterije su otporni na. Najpoznatiji od njih je Staphylococcus aureus otporan na meticilin (MRSA). Dugo se smatrao uzročnikom bolničkih infekcija, ali se od sredine 90-ih godina prošlog stoljeća zna za bolesti kod ljudi koji nisu bili u bolnicama. Najčešće su to bile gnojne lezije kože, međutim, prilikom češanja lezija, MRSA je ušla u krvotok i zahvatila druge organe. Staphylococcus aureus otporan na meticilin bio je osjetljiv na vankomicin, otrovni antibiotik koji ipak uništava organizam.
Druga bakterija otporna na antibiotike je Staphylococcus aureus (VRSA) otporna na vankomicin. Liječnici i znanstvenici su očekivali ovaj organizam otkad su saznali za postojanje MRSA-e i enterokoka otpornog na vankomicin (VRE), nepatogenog organizma koji živi u crijevima, budući da je horizontalni prijenos omogućio razmjenu gena između ovih bakterija. VRSA je prvi put otkrivena 2002. godine i doista je bila otporna na sve moćne antibiotike koji su postojali u to vrijeme. Ipak, slaba mu je točka bila osjetljivost na stari sulfonamide – baktrim.
Staphylococcus aureus se nalazi u tlu i vodi, često kontaminira hranu i može zaraziti sva tkiva i organe: kožu, potkožno tkivo, pluća, središnji živčani sustav, kosti i zglobove itd. Ova bakterija može uzrokovati sepsu, gnojne lezije kože i infekcije rana.
Optimalna temperatura za Staphylococcus aureus je 30-37 ° C. Može izdržati zagrijavanje do 70-80 ° C 20-30 minuta, suhu toplinu - do 2 sata. Ova bakterija je otporna na isušivanje i salinizaciju i može rasti na podlogama s 5-10% udjela kuhinjske soli, uključujući riblji i mesni balik i druge proizvode. Većina dezinficijensa ubija Staphylococcus aureus.
Staphylococcus aureus luči širok spektar toksina. Membranotoksini (hemolizini) četiri vrste osiguravaju hemolizu; osim toga, membranotoksin α u pokusima uzrokuje nekrozu kože, a kada se primjenjuje intravenozno, smrt životinja. Dva tipa pilinga oštećuju stanice kože. Leukocidin (Panton-Valentinov toksin) uzrokuje poremećaj ravnoteže vode i elektrolita u stanicama leukocita, posebice makrofaga, neutrofila i monocita, što dovodi do njihove smrti.
U skladu s TR CU 021/2011 i drugim dokumentima, sadržaj koagulazno pozitivnih stafilokoka također je ograničen u hrani. To su bakterije koje proizvode koagulazu, enzim koji uzrokuje zgrušavanje krvne plazme. Osim toga S. aureus To uključuje S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae, S. pseudintermedius i S. schleiferi podvrsta. koagulansi... Prema nekim izvještajima, S. leei je također koagusalno pozitivna.
Za određivanje Staphylococcus aureus u uzorcima koriste se i mikrobiološke metode, uključujući selektivne medije, i DNA analiza PCR metodom.
