100 RUR esimese tellimuse boonus
Vali töö liik Diplomitöö Terminitöö Abstraktne Magistritöö Praktikaaruanne Artikkel Aruanne Arvustus Eksamitöö Monograafia Probleemide lahendamine Äriplaan Vastused küsimustele Loovtöö Esseed Joonistamine Esseed Tõlkesitlused Tippimine Muu Teksti ainulaadsuse suurendamine Doktoritöö Laboratoorsed tööd Abi on-line
Uuri hinda
Stafülokokoos haiglates 40-60%
Praegu ei kuulu perekond Staphylococcus sugukonda Micrococcaceae (alates 90ndate algusest). Micrococcaceae perekonda ei eksisteeri (kuna selle komponentide vahel puudub geneetiline seos). Nad ühinesid ainult grampositiivsete aeroobsete ja fakultatiivsete anaeroobsete kokkide alusel, jagunedes mitmeks tasapinnaks.
Mikrokokk on geneetiliselt seotud aktinomütseetidega.
Stafülokokk on geneetiliselt seotud Clostridiaga.
Hapnikuvabas keskkonnas fusobakterite, pravotella, bakteroidide (ranged anaeroobid) uurimisel, kui te ei kasuta antibiootikumidega (aminoglükosiididega) söödet, siis tapavad stafülokokid (ja enterobakterid) kõik !!!
Ammendumise külvimeetod
Stafülokokid on fakultatiivsed anaeroobid. Micrococcus - ranged aeroobid
Diferentseerimine on aeroobse ja anaeroobse glükoosi lagunemise test. Kõik Staphylococcus glükoos + veel vaseliiniõli all. Micrococcus ei ole.
Staphylococcus - üle 30 liigi, koos alamliikidega - 44. Neid eristab 33 testi.
Halotolerantsuse piir on keskkond, kus NaCl on 7,5% ja rohkem.
Micrococcus - kasvab endiselt 6,5% ja ainult Staphylococcus on kõrgem. (LSA – 10% NaCl). Mõned tüübid on 15% NaCl.
Piima-soola agar - mikrokokid kasvavad, sest seal allpool NaCl.
Kodanlus - Chapmani sööde - mannitool-soolagar (1% mannitool) - 7,5% NaCl. Mannitool = mannitool nagu glütserool = glütseriin
Staphylococcus'i sihipärane isoleerimine (näiteks sanitaar- ja bakterioloogiliste uuringute käigus). Happe moodustumise tõttu kollakas tsoon. Selle alternatiivina on meil - ZhSA.
Need. kui isoleerime kookid söötmel, mille NaCl on ≥ 7,5, siis on need alati glükoos +, sest see on Staphylococcus ja Micrococcus ei kasva
Mikrokokkide morfoloogia on veidi erinev stafülokokkidest – nii kolooniad kui rakud suurem kui stafülokokkide puhul.
Igal inimesel on nahal 7-10 liiki mikrokokke (ja neid on kokku umbes 15 liiki), domineerib M. luteus - suured kollased kolooniad mitteinhibeerivatel söötmetel (vana nimetus on õhusartsiinid, päris sarksiinid all ei kasva. aeroobsed tingimused!!!). Need on grammi järgi ühtlaselt värvitud. Kuhjade, vihikute, pakkide kujul. Teised on valged, värvitud jne. M.livi - email valge. M.cristi - punased kolooniad.
Staphylococcus aureus värvub Grami järgi ebaühtlaselt (chintz värvus). Kimbud - toodab sageli S. aureus't, samuti hunnikuid, märkmikke, pakendeid jne. Vedelate stafülokokid - üksikud, paarid, kuhjad.
Ilma munakollaseta söötmetel S. aureus'e pigmenti ei teki ja kolooniad on hallid.
Karotenoidid ei lahustu vees ja kolooniat ümbritsev keskkond ei määri kunagi Staphylococcus ja Micrococcus.
Angelina Hess – tõi agara kolmapäevakutele 19. sajandi keskel
Mikrokokk on ka UPMF - sepsis. In vitro on kõige suhtes tundlik. Loomadel ravib penitsilliin - 5 ühikut süsti kohta - penitsilliini leiutise tasemel - sepsist. Kuid in vivo ravi on väga raske. Sepsis südame bypass operatsiooniga patsientidel. Kui nad satuvad südame-kopsu masinasse.
Planococcus - meid ei huvita - nad ei ole merevees ega inimesele ohtlikud
Stomatokokid - 1 tüüp. Nad kasvavad hästi CA-l (kõik kasvab CA-l), kuid nad ei kasva soolasöötmel. Neil pole erilist kliinilist tähtsust. UPMF. Väga harva põhjustavad igemepõletikku ja stomatiiti (kuid sagedamini on need haigused põhjustatud anaeroobidest ja viirustest).
S. aureus subsp. aureus
S. aureus subsp. anaerobius - ei kasva aeroobsetes tingimustes (range anaeroobne)
Stafülokokkide hulgas pole saprofüüte - kõik oportunistlikud... Rohkem kui 86 nosoloogilist haigusvormi.
S. aureus ja S. epidermidis - 45% kogu stafülokokoosist. Toidumürgitus - ainult S. aureus (S. epidermidis - võib põhjustada ainult väikelastel). Enterotoksiine toodab ainult S. aureus.
Iga inimese nahal elab 10-12 tüüpi stafülokokke.
Nina eesmised osad on peamine biotoop. Pindalaühiku kohta on kõige rohkem.
S. epidermidis võib koos S. aureusega põhjustada ka haiglanakkuste puhanguid.
Vastsündinutel: konjunktiviit S. epidermidis varem Moskvas 70ndatel; haigla kopsupõletik S. epidermidis nüüd.
Plasmiide edastatakse kiirusega umbes 2 tundi (Staphylococcus aureus viibis teise inimese nahal 2 tundi ja sai uue plasmiidi).
Kandja.
Sünnitusabiasutustes rutiinset stafülokoki uuringut ei tehta (ainult puhangute korral) - tellimus 345. Kirurgilisel profiilil on praeguseks 720 tellimust (seda ei teostata kusagil maailmas). Stafülokoki infektsioonide arv on nii "kodanlastel" kui ka meie riigis, sõltumata sanitaartingimustest.
Katsesüsteemide järgi saab eristada kuni 12-15 tüüpi stafülokokke ja mitut tüüpi mikrokokke.
691 tellimust – tühistatud sünnitusmajadele. Uuel 345 järjekorras ei ole bakterioloogilist osa, seetõttu juhinduvad bakterioloogias kõik endiselt 691 korraldusest.
Rutiinne stafülokoki kandmise uuring on tühistatud.
Koagulaaspositiivseid stafülokokke on praegu 5 tüüpi.
|
koagulaas |
maltoos |
flokulatsioon |
Hemolüüs CA-l inimverega |
||||
|
W / w päev |
Peaaegu 100% |
||||||
|
± vähem kui 50% |
|||||||
|
W / W öö |
S. aureus ei anna koagulaasi väga harva – massiivse antibiootikumravi saanud patsiendi primaarsete kultuuridega. Seetõttu külvasime lengile uuesti ja seejärel panime plasma tagasi. Kui ei, siis see pole S. aureus.
Pigment kõrge valgusisaldusega ja valgusega söötmel (YSA, vadaku sööde valguga)
Koagulaasnegatiivsete stafülokokkide hulgas võivad mõned moodustada ka pigmenti. S promagenes - moodustab kollase pigmendi mis tahes söötmel
Atsetoiin = atsetüülmetüülkarbinool - VP (Voges-Proskauer) reaktsioon
Tema sööde glükoosiga on poolvedel. Soolalahusega nakatamisel on alati glükoospositiivne, vähemalt kolonni ülaosas.
Lõplik negatiivne vastus poolvedela His söötme kohta glükoosiga antakse alles 5. päeval.
Kui gaas - eeldame, et stafülokokk on segatud või üldse mitte.
Mannitooliga poolvedel sööde jäeti välja 1974. aastal – lõplik eitav vastus oli alles 5. päeval. Ainult tassi peale asetatud – vastus hommikul.
Tihe sööde glütseriiniga (1%) (võib asendada mis tahes suhkru ja alkoholiga). Perekondades Staphylococcus ja Micrococcus eristamiseks mõeldud vedelat ja poolvedelat söödet ei kasutata kunagi. Indikaator - bromotümoolsinine, pH - neutraalne; või bromkresoolpunane, bromotümoolpunane. Külvame naastudega - kuni 10 kultuuri tassi kohta. Radiaalne triip - kuni 6 kultuuri tassi kohta. Stafülokoki ümber - kollaseks muutumine. Mikrokokid ei kasuta glütseriini.
S. aurecularis annab testsüsteemidel 95-99% sarnasuse S. aureusega ja ainult plasma hüübimisreaktsiooni järgi saab teda eristada.
Koagulaasnegatiivsed stafülokokid
Teatud tingimustel võivad nad pigmenti toota.
Stafülokokkide puhul ei ole võimalik 1-2 testiga liikide kaupa eristada.
See kasvab plasmas mannitooli + helveste kujul, ainult 6-7 liiki.
|
koagulaas |
Leeliseline fosfataas |
trehaloos |
||||
|
Rohkem kui 20% tüved |
||||||
|
5-10% tüved |
||||||
|
95-100% tüved |
||||||
|
5% tüved |
||||||
|
S. saprophiticus |
5% tüved |
100% S. aureus'est on hemolüütiline aktiivsus.
S. saprophiticus on väga haruldane. Noorte naiste tsüstiit ja uretriit – antibiootikumide ja keemiaravi suhtes tundlikud
Koagulaas-negatiivsed ei saa muutuda koagulaas-positiivseks.
S. epidermidis ei ole kunagi koagulaaspositiivne, olenemata sellest, mis on kirjutatud järjekorras 720
Eosteta rakk võib elada 10-12 päeva.
Leeliseline fosfataas on iseloomulik ainult S. epidermidisele.
Aluseline fosfataas - paranitrofenoolfosfaat või fenoolftaleiinfosfaat ALP-testidest biokeemias - 50 mg 100 ml agari kohta kuni 20 tüve plaadi kohta.
Para-nitrofenoolfosfaat → para-nitrofenool (kollane) ja söötme värvus on sidrunikollane.
Fenoolftaleiinfosfaat → fenoolftaleiin (värvitu). Leelistage 3-10% ammoniaagilahus (tilgutage topsikaanele) Vaarikakolooniad.
Saate osta 10% fenoolftaleiinfosfaadi lahust. Säilitatud aastaid külmkapis. 0,5 ml lahust 100 ml agari kohta.
S. epidermidis on loomulikult tundlik novobiotsiini suhtes.
Letsitoviitelaas (kollasefaktor) - rahvusvahelises klassifikatsioonis ei kasutata, ainult siin.
20-25% S. epidermidis letsitinaas-positiivne.
80% S. aureust - inimpäritolu - annab letsitovitelaasi. Letsitinaasnegatiivne S. aureus – loomadelt.
Teised stafülokokid võivad samuti anda. See tähendab, et kui letsitovitelaas +, siis on see 80% S. aureus, 20% muud stafülokokid.
Luminal ALCA tassid - puhastustsoon (proteaas) - see pole meile oluline.
Hägusus – ülekaalus on lipaasid – pole samuti oluline.
Kodanlik verekandja - lamba erütrotsüütidest. Arvati, et S. aureuse inimtüved toodavad ainult α-hemotoksiini, kuid nüüd on olemas ka β-hemotoksiin. Seda saab lahti võtta ainult lamba erütrotsüütidel.
β-hemotoksiin annab ööpäevaga mittetäieliku hemolüüsi tsooni ja kui siis tööpäeva lõpuni külmikusse panna, läheb tsoon täiesti heledamaks.
S. aureus toodab 2 ensüümi
1) termolabiilne DNaas (nukleaas) - seda leidub kõigis stafülokokkides ja enamikes teistes mikroobides.
2) Termostabiilne DNaas (nukleaas) – saadaval ainult S. aureus'es. Ei hävine keetmisel ega isegi lühiajalisel autoklaavimisel.
Ja meie tellimuste järgi määratakse ainult termolabiilne DNaas (pole mõtet).
Kuumutatud toidus (kui PTI fakt on peidetud) stafülokokk hävib, kuid toksiinid jäävad alles. Termostabiilse DNaasi olemasolu järgi saab määrata, kas S. aureus esines.
Kõrgelt polümeriseeritud DNA tellimuste järgi 1-2 mg 1 ml söötme kohta (pH = 8,0). Naastude kultuur (või süstimine). 24 tundi. Arendame välja, valades 3N HCl tassi, tekib DNA sade HCl-ga ja seal, kus DNaas on töötanud, näeme puhastustsooni. S. aureusel on selle raadius 10-12 mm, S. epidermidis on raadius 4-5 mm. S. aureus'e tapetud kultuuriga augu ümber - 7-8 mm.
S. epidermidis moodustab ainult termolabiilset DNaasi, S. aureus - mõlemad DNaasid - tsoon on suurem.
Lk 38/91
ERAMEDITSIINILINE MIKROBIOLOOGIA
PATOGEENNE KOKKE
Inimestel erinevate kliiniliste ilmingutega haigusi põhjustavate patogeensete kokkide hulka kuuluvad: 1) stafülokokid, 2) streptokokid, 3) pneumokokid, 4) meningokokid ja 5) gonokokid.
Tinktoorse tunnuse (värvimise) järgi võib neid jagada kahte alarühma: grampositiivsed kokid (stafülokokid, streptokokid ja pneumokokid), gramnegatiivsed kokid (meningokokid ja gonokokid).
Kõigi patogeensete kokkide iseloomulik tunnus on võime põhjustada mädaseid põletikulisi protsesse, mistõttu neid nimetatakse ka püogeenseteks (püogeenseteks) kokkideks.
Kõige teravamalt ja pidevalt püogeensemad omadused väljenduvad stafülokokkides.
STAFÜLOKOKKID
Morfoloogia ja toonilised omadused. Stafülokokid – Staphylococcus (esimest korda eraldas Pasteur 1880. aastal) on korrapäraste pallide kujuga, mille keskmine läbimõõt on 0,8–0,9 mikronit. Puhaskultuuri määrdumisel on stafülokokid paigutatud hunnikutesse ja kobaratesse, mis meenutavad viinamarjakobarat (joonis 60). Mädas ja muus patoloogilises materjalis võib sageli leida üksikuid kokke, paaris- ja isegi lühikesi ahelaid. Värvivad hästi põhiliste aniliinvärvidega, on grampositiivsed, ei moodusta eoseid, ei moodusta kapsleid ja on liikumatud.
Kultuurilised ja biokeemilised omadused. Stafülokokid kasvavad hästi tavalistel toitainetel nii vaba hapniku olemasolul kui ka puudumisel. Optimaalne temperatuur 37 °.
Riis. 60. Stafülokokk (a) ja streptokokk (b) puhaskultuuris.
Riis. 61. Stafülokoki kolooniad mesopataamia agaril. Uv. kakskümmend.
Riis. 62. Külvamine süstimisega želatiini.
Üksikud kolooniad agari pinnal on ümmargused keskmise suurusega kettad, kumerad, niisked, läbipaistmatud, homogeensed või peeneteralise struktuuriga (vt joonis 01). Kolooniate värvus sõltub stafülokokkide poolt toodetud pigmendist ja võib olla kuldne (Staphylococcus aureus), sidrunkollane (Staphylococcus citreus) ja valge (Staphylococcus albus). Agar-viltu triibutamisel moodustub Staphylococcus aureus'e rikkalik kasv, pigmenteerunud.
Staphylococcus pigmendid on lipokroomid, vees lahustumatud ja värvivad ainult kultuuri, mitte söödet. Pigmendi moodustumine on intensiivne, kui mikroorganisme kasvatatakse hapniku juuresolekul, toatemperatuuril, valguse käes.
2-3. kasvupäeval želatiini süstimisega külvamisel on söötme pinnal märgata veeldamistsooni. Kultuur langeb vedeldudes puuvillase setena põhja (joon. 62).
Puljongis annavad stafülokokid rikkalikku kasvu. Pärast 24 tundi termostaadis olemist muutub puljong häguseks ja katseklaasi põhja moodustub sade.
Stafülokokid kiiresti kohupiima, andes sellele happelise reaktsiooni.
Kääritavad (ilma gaasita) laktoos, glükoos, maltoos, mannitool. Mannitooli lagundamise võime iseloomustab tavaliselt stafülokoki patogeenseid tüvesid.
Patogeensed stafülokokid vereagarplaatidel moodustavad hemolüüsitsooniga ümbritsetud kolooniad ja koaguleerivad tsitraadiga vereplasma.
Vastupidavus. Staphylococcus aureus on üks väga püsivaid mikroobe. Temperatuur 80 ° tapab ta märjana 10 minuti jooksul. Stafülokoki temperatuuri 70 ° hoitakse kuni 1 tund. Karboolhape (3-5% lahus) tapab need 15-30 minuti jooksul. Mädanikus püsib staphylococcus aureus pikka aega.
Toksiinid, stafülokokkide ensüümid, nende patogeensus loomadele. Patogeensed stafülokokid toodavad mitmeid toksiine ja ensüüme. Stafülokoki hemolihiin lahustab punaseid vereliblesid. See toksiin on termolabiilne (laguneb 55 ° juures), kuulub eksotoksiinide hulka ja sellega loomi immuniseerides võib saada antitoksiini. Stafülokokikultuuride filtraadil on ka nekrootiline ja surmav toime. Nüüdseks on tõestatud, et hemolüsiin, nekrotoksiin ja surmav toksiin on ühe stafülokoki eksotoksiini komponendid. Need toksiinid on üksteisest lahutamatud ja ühe tuvastamine on isoleeritud stafülokoki patogeensuse tõend. Mõned Staphylococcus aureuse hemolüütilised tüved toodavad enterotoksiini, mis põhjustab ägedat gastroenteriiti. Stafülokoki kultuuride filtraatides leitakse sageli leukotsüüte hävitavat mürki leukotsidiini. Patogeensed stafülokokid eraldatakse ensüümidest: 1) plasma coagul az y - hüübiv plasma, 2) fibrinolüsiin - lahustab fibriini trombe, 3) hüaluronidaas - lahustab hüaluroonhapet, sidekoe elemente kleepuvat ainet, 4) penitsillinaas - inaktiveeriv - ja 5) penitsillinaasi hägususala kolooniate ümber munakollase-soolagaril (Chistovichi sööde).
Laboriloomadest on stafülokoki suhtes kõige tundlikumad küülikud ning vähemal määral merisead ja hiired. Küülikutel ilmneb kultuuri intradermaalse süstimise korral väljendunud nekroos, subkutaanse süstimise korral tekivad abstsessid ja nakatumine väga virulentsete stafülokoki tüvedega põhjustab sepsise ja loomade surma. Imetavad kassipojad ja noored hiired on stafülokoki enterotoksiini suhtes kõige tundlikumad.
Stafülokokkide klassifikatsioon. Stafülokokkide vana klassifikatsioon nende poolt eritatava pigmendi järgi (kuldne, valge ja sidrunikollane) ei võimalda nende patogeensust õigesti määrata. Seetõttu peetakse praegu Grossi pakutud stafülokokkide klassifikatsiooni kõige õigemaks. Selle klassifikatsiooni järgi jagunevad kõik stafülokokid kolme rühma: patogeensed, kergelt patogeensed ja mittepatogeensed.
Esimene rühm - patogeensed stafülokokid:
a) 5% vereagariga plaatidel moodustub selge hemolüüsi tsoon;
b) küülikule intradermaalselt manustatuna põhjustavad need väljendunud nekroosi nähtusi, mis mõnikord lõppevad looma surmaga;
c) toodavad ensüümi plasmakoagulaasi, mis põhjustab plasma koagulatsiooni 2 tunni jooksul;
d) määratakse peamiselt sepsise või ägeda mädase infektsiooniga patsientidelt.
Teine rühm on nõrgalt patogeensed stafülokokid:
a) vereagarplaatidele moodustub kerge mittetäieliku hemolüüsi tsoon;
b) intradermaalselt süstides põhjustab küülik süstekohas naha punetust, mõnikord infiltratsiooni, sagedamini ilma nekroosita;
c) tsitraadiplasmasse inokuleerituna põhjustavad nad hüübimist 6 tunni jooksul ja hiljem;
d) erituvad follikuliidi ajal naha pinnalt, ülemiste hingamisteede katarri korral limaskestadelt, haavade pinnalt, kuid mitte nende sügavusest.
Kolmas rühm on mittepatogeensed stafülokokid:
a) vereagarplaatidel hemolüüsi ei tuvastatud;
b) küülikule nahasisese manustamise korral ei täheldata nekroosi ja infiltratsiooni nähtusi, mõnel juhul ilmneb naha punetus;
c) plasma koagulatsiooni reaktsioon on negatiivne;
d) leidub pidevalt tervel nahal, neelu, nina limaskestadel ja õhus.
Patogenees ja haigused inimestel. Stafülokokid on väga levinud mikroobid. Neid leidub õhus, vees ja pinnases, inimestel – peaaegu pidevalt nahal ja limaskestadel. See seletab asjaolu, et Staphylococcus aureus on kõige sagedasem igasuguste mädaste tekitaja. Naha ja limaskestade kahjustus või nende vastupanuvõime vähenemine avab "värava" stafülokoki infektsioonile.
Kõige sagedamini mõjutab nahk. Stafülokokid on paise – juuksefolliikulite mädapõletiku – tekitajad. Kui keeb olemuselt mitmekordne, nimetatakse seda haigust furunkuloosiks. Kui mitu paise ühinevad, moodustades ulatuslikuma mädase infiltraadi, tekib karbunkel.
Stafülokokid leitakse koos abstsessidega (abstsessid), mädanevates haavades, limaskestade katarriga, septitseemia ja septikopeemiaga (sepsis koos mädaste koldete tekkega siseorganites). Enterotoksilised Staphylococcus aureus'e tüved võivad põhjustada toidumürgitust. Viimaseid täheldatakse stafülokokiga nakatunud piima ja muude piimatoodete, koorega kookide jms tarbimise tagajärjel, kuna nendes toodetes leiab stafülokokk oma paljunemiseks optimaalsed tingimused. Patogeensed stafülokokid võivad piima sattuda kas mastiidiga lehmade või püodermat põdevate lüpsjate käest.
Immuunsus. Inimestel puudub kaasasündinud immuunsus stafülokoki suhtes. Inimesel on aga selle mikroorganismi suhtes märkimisväärne resistentsus, mis on seletatav naha kaitsva rolliga ja antikehade olemasoluga veres.
Ilmselt võib omandatud immuunsus tekkida, mida tõendab antikehade tiitri tõus patsientidel ja neil, kes on paranenud. See immuunsus on aga ebastabiilne. Lisaks on täheldatud, et paljudel inimestel, kellel on olnud furunkuloos, on suurenenud vastuvõtlikkus stafülokokkidele.
Stafülokoki vastupanuvõime võib nõrgeneda erinevatel põhjustel – diabeet, traumad, kurnavad haigused jne.
Mikrobioloogiline diagnostika. Mäda uurimine. Kõige sagedamini on mikrobioloogiliste uuringute materjaliks mäda. Sel eesmärgil eemaldatakse lahtiste kahjustuste korral pärast haavapinna eelnevat puhastamist steriilse vatitupsuga eritis haava sügavamatest osadest. Suletud protsessides (furunkel, abstsess) tehakse samal eesmärgil pärast naha desinfitseerimist steriilse süstlaga mädanemise fookuse punktsioon. Saadud mädast tehakse määrded, värvitakse sinise ja grammiga ning uuritakse mikroskoobiga.
Kokkide paiknemise ja tinktuuriomaduste järgi on stafülokokke ja streptokokke raske eristada, seetõttu alustavad nad bakterioloogilisi uuringuid, see tähendab mäda nakatamist plaatidel lihtsa vereagariga, munakollase-soolagariga (vt jaotist " Sanitary Microbiology", lk 454) ja rikastussöötmel (suhkrupuljong). Seemnetega tassid pööratakse tagurpidi ja puljong asetatakse 1-2 päevaks 37 °C termostaadi.
Vere agariplaatidel moodustavad kolooniad hemolüüsitsoonid, mille läbimõõt on sageli mitu korda suurem kui koloonia läbimõõt. Need läbipaistvad värvitud hemolüüsi tsoonid tekkisid stafülokoki hemotoksiini põhjustatud punaste vereliblede lahustumise tõttu. Koloonia-soolagariga plaatidel kasvavad patogeensed stafülokokid, moodustades kuldse pigmendi ja hägune tsoon - koloonia ümber vikerkaarekorolla kujul. Ühest kolooniast valmistatakse preparaat, värvitakse Grami abil ja uuritakse mikroskoobiga. Grampositiivsete kokkide tuvastamine preparaadis, mis paiknevad viinamarjakobarate kujul, annab õiguse anda ligikaudne positiivne tulemus. Seejärel kultiveeritakse ülejäänud kolooniat puhta kultuuri saamiseks kaldus agarile. Vajalik on eristada patogeenset stafülokokki mittepatogeensest, st uurida kasvu vereagaril, munakollase-soolagaril, inokuleerida nitraadiplasmasse ja määrata toksilisus loomadel.
Plasma koagulatsiooni test. Plasma koagulatsiooni reaktsiooniks soovitab G. V. Vygodchikov järgmist tehnikat. Küüliku südamest võetakse 10 ml verd, mis asetatakse 1 ml 5% naatriumtsitraadi lahusega katseklaasi. Veri tsentrifuugitakse ja plasma aspireeritakse. Saadud plasma lahjendatakse enne katset soolalahusega 1: 4 ja valatakse steriilsetesse 0,5 ml katsutitesse. Stafülokokkide kolooniad inokuleeritakse aasaga küüliku nitraatplasmaga katsutitesse, asetatakse 37° temperatuuriga termostaati ja plasma hüübimist kontrollitakse iga 2-3 tunni järel. Patogeensed stafülokokid koaguleerivad plasma 2-10 tunni jooksul, kõige sagedamini 4 tunni jooksul.
Toksilisuse test. Stafülokokikultuuride toksilisuse määrab kogemus küülikutel ja enterotoksiinide toksilisus imetavatel kassipoegadel. Mikroobide suspensioon soolalahuses valmistatakse stafülokokkide ringist kaldus agaril ja seatakse vastavalt optilisele standardile, arvutades 2 miljardit mikroobikeha 1 ml suspensioonis. Küüliku küljelt või tagaküljelt kitkutakse vill ja loomale süstitakse nahasiseselt 0,2 ml mikroobisuspensiooni. Positiivse reaktsiooni korral moodustub süstekohta infiltraat ja seejärel nekroos.
Surmava toksiini tuvastamiseks süstitakse küülikule intravenoosselt stafülokoki puljongikultuuri filtraati kiirusega 0,75 ml 1 kg kehamassi kohta. Looma surm saabub 15 minutiga.
Enterotoksiini määramiseks toidetakse 1,5-2 kuu vanuseid kassipoegi (kaaluga 400 g) algse saastunud toote või stafülokoki piimakultuuriga. Mürgistusnähud (kõhulahtisus, mõnikord oksendamine) tekivad 30-60 minuti jooksul. Vaatlus toimub 4-6 tundi ja kui selle aja jooksul kassipoegadel reaktsiooni ei toimu, loetakse bioloogiline test negatiivseks.
Vereanalüüsi. Kui patsient kahtlustab sepsist, võetakse küünarluuveenist süstla abil 10 ml verd ja nakatatakse 100-200 ml suhkrupuljongisse. Külv asetatakse rikastamiseks 24-48 tunniks termostaati. Positiivsel juhul muutub sööde häguseks ja sealt saadud määrdudes leitakse iseloomuliku kuju ja asukohaga grampositiivseid kokke. Puljong subkultuuritakse vereagariga plaadile ja viiakse läbi edasised uuringud, nagu eespool kirjeldatud. Puljongit hoitakse termostaadis 10 päeva, külvates 5% vereagariga iga 2 päeva järel.
Teiste materjalide uurimine. Suure hulga võõrmikroobidega (väljaheited, röga) saastunud materjalide uurimisel on soovitatav kasutada 7,5% naatriumkloriidiga agarit, millele on lisatud 10% sooja lõssi (Petrovich medium). Sellisel agaril on kõrvalise mikrofloora kasv oluliselt pärsitud.
Faagi trükkimine. Faagide tüpiseerimisel kasutatakse tüüpiliste stafülokoki faagide komplekti, mis koosneb 21 faagist, mis on jagatud nelja rühma. Iga tüüpiline faag on võimeline paljunema ainult vastaval stafülokoki tüvel. Stafülokokkide faagitüübi määramine on eriti oluline
toiduainete sanitaar- ja bakterioloogiline uurimine nakkuse allika kindlakstegemiseks ja epideemiliste seoste tuvastamiseks.
Spetsiifiline ravi ja keemiaravi. Stafülokoki vaktsiini kasutatakse laialdaselt korduvate ja krooniliste infektsioonide (nt furunkuloos) raviks. Nende haiguste ennetamiseks kasutatakse toksoidi.
Stafülokoki infektsioonide ravis kasutatakse edukalt ka sulfoonamiidide seeria kemoterapeutilisi ravimeid (norsulfasool, sulfodimesiin jt), antibiootikume (suurtes annustes penitsilliin, erütromütsiin, oksatsilliin jne), stafülokoki bakteriofaagi (nahakahjustuste korral). Raske stafülokoki sepsise korral on soovitatav kasutada hüperimmuunset antistafülokoki plasmat ja gammaglobuliini, mis on saadud toksoidiga immuniseeritud doonoritelt.
Laialt levinud stafülokoki infektsioonid, alates ülemiste hingamisteede haigustest, võivad rünnata kogu keha. Teatud elundite valdava kahjustuse tõttu võib stafülokoki infektsioonide uurimise materjaliks olla röga, mäda, veri, loputus ninaneeluloputus, kuseteede eritis, toit (peamiselt piima- ja kondiitritooted), nakatunud pindade pesuveed, oksendamine, eksudaadid, valitud rangelt vastavalt aspektireeglitele.
Materjali analüüsimisel kasutatakse mikroskoopilisi, bakterioloogilisi (mikroobide puhaskultuuri eraldamine ja nende tuvastamine) ja bioloogilisi meetodeid.
I. MIKROSKOOPILINE MEETOD
Mikroskoopiline meetod on iseseisva tähtsusega ainult aseptilise töö puhul materjalidega, mis on tervel inimesel steriilsed (näiteks veri, tserebrospinaalvedelik). Stafülokokkide tuvastamisel on sel juhul sõltumatu diagnostiline väärtus. Muudel juhtudel kasutatakse mikroskoopilist meetodit esialgse, ligikaudse meetodina. Selle kasutamisel tuleb pöörata tähelepanu mikroorganismide arvule igas vaateväljas (stafülokokihaiguste korral võib patogeenne patogeen ülejäänud mikrofloora välja tõrjuda ja seda leidub tohututes kogustes määrdudes), kimpude suurusele. (kõrge patogeensusega stafülokokk jaguneb intensiivselt, isenditel pole aega hajutada ja anda suuri kobaraid - kobaraid), üksikute isendite suurus (patogeensed stafülokokid on enamasti väga väikesed).
II. BAKTERIOLOOGILINE MEETOD
Bakterioloogiline meetod on patogeenide puhaskultuuri eraldamine ja nende tuvastamine.
Stafülokokid on üks levinumaid mikroorganisme. Neid leidub ka tervel inimesel. Seetõttu on haiguse diagnoosimiseks, selle stafülokoki olemuse väljaselgitamiseks väga oluline tõestada isoleeritud bakterite patogeensus. Samas on diagnostilise probleemi lahendamine tihedalt seotud selle nakkuse epidemioloogia, ravi ja ennetamise küsimuste selgitamisega. Selle põhjal koosneb bakterioloogiline meetod mitmest etapist ja suunast.
Kõik ülaltoodud uuringu etapid kajastuvad diagrammil:
Patogeeni puhaskultuuri eraldamisel tuleks arvesse võtta selle halofiilsuse kultuurilisi omadusi (hea areng lauasoola liigse sisalduse juuresolekul koos muu mikrofloora samaaegse pärssimisega), suurt valkude ja süsivesikute vajadust. See saavutatakse valikuliste toitekeskkondade kasutamisega, mis täidavad samaaegselt diferentsiaaldiagnostika funktsioone.
STAFÜLOKOKKIDE TOITUMISE KOOSTIS
Analüüsi läbiviimisel on vaja arvesse võtta järgmisi kõrvalekaldeid stafülokokkide tüüpilistest omadustest.
VIRULENTSUSE PÕHINÄITAJATE MÄÄRAMINE
Stafülokokkide virulentsuse peamised näitajad on hemolüütiline aktiivsus, plasma koagulaasi ensüümi tootmine ja nekrotoksilisus.
Kultuuride patogeensuse astme hindamisel kasutatakse laialdaselt Grossi teste, mille järgi võib kõik stafülokokid jagada kolme rühma. Kahtlemata patogeensete stafülokokkide esimesse rühma kuuluvad bakterid, millel on (äge hemolüüsiv aktiivsus, tsitraadiplasma hüübimine 1-2 tunni jooksul ja väljendunud nekrotiseerivad omadused. Teise rühma oportunistlikud või mõõdukalt patogeensed stafülokokid on templid, mis annavad agaril 5% hemolüüsi ebaolulisel määral küüliku või lamba veri, hüübiv plasma 6 tunni pärast ja küülikule nahasisesel manustamisel, mis põhjustab punetust ja infiltratsiooni Kolmandasse mittepatogeensete stafülokokkide rühma kuuluvad kultuurid, mis ei hemolüüsi erütrotsüüte, ei koaguleeri plasma ega oma nekrotiseerivaid omadusi.
Seega põhineb isoleeritud stafülokoki virulentsuse hindamine patogeense toime kolme näitaja põhjalikul testil.
Samas on ametlikke viiteid sellele, et stafülokokkide eraldamisel piimhappetoodetest, eriti pikaajaliselt külmkapis säilitatavatest toodetest, võivad üksikud patogeensuse tunnused kaduda, säilitades samal ajal toksiinide moodustamise võime tervikuna. Järelikult tuleks patogeenseks pidada stafülokokke, mille puhul üks patogeensuse tunnustest kaob (Erismani Instituudi 1967. aasta juhiskiri).
HEMOTOKSIINI MÄÄRAMINE viiakse läbi kultuuri otsese inokuleerimisega vere MPA-le, mis sisaldab 5–10% defibrineeritud küüliku või lamba verd. Inimvere lisamine on ebasoovitav, kuna alfa-hemolüsiini sekreteerivad stafülokokid ei hävita inimese erütrotsüüte ja seetõttu on selle haigelt inimeselt eraldatud tüve patogeensuse kohta tehtud otsus ebausaldusväärne.
Mõnikord nõrgeneb või kaob stafülokokkide varieeruvuse tõttu, samuti kultuuride pikaajalisel säilitamisel ebasoodsates tingimustes viimaste hemolüütiline aktiivsus. Bakterite hemolüüsivõime taastamiseks on soovitatav lisada hemotoksilisuse testitavale söötmele redutseerivat segu kiirusega 0,015 g iga 10 ml söötme kohta. Segu koosneb ühest osast Na 2 SO 3 (naatriumsulfaat) ja kahest osast Na HSO 3 (naatriumvesiniksulfaat). Rekonstitueerimissegu säilitatakse pimedas ja lisatakse ex tempore sulakeskkonnale. Eksotoksiini hemolüütilisuse säilitamiseks stafülokoki kultuuris on soovitatav lisada 100 ml kultuurile ka 100 ml küllastunud Na 2 S 2 0 3 lahust (redutseerija) ja 250 ml hüdrokinooni küllastunud lahust (stabilisaator). filtraat. VI Ioffe soovitab hemolüütilise aktiivsuse taastamiseks lisada iga 0,4 ml kohta ainult 0,1 ml 1% naatriumsulfaadi Na 2 SO 3 lahust.
PLASMOKOAGULAASI MÄÄRAMINE viiakse läbi stafülokoki kultuuri inokuleerimisega kitsas katseklaasis 0,5 ml 5% küüliku või inimese tsitraadi plasmaga. Põllukultuurid asetatakse 6-10 tunniks termostaadi, mille tulemused registreeritakse 1, 2, 3 ja 6 tunni pärast. Inimese vereplasma annab ebajärjekindlaid tulemusi ning glükoosi ja mertiolaadiga doonoriplasma üldiselt ei sobi. Kui inimese plasmat ei ole võimalik asendada, kasutatakse seda alles pärast 10-kordset lahjendamist soolalahusega.
Koos klassikalise plasma koagulaasi määramise meetodiga kasutatakse ka plasma koagulatsiooni reaktsiooni klaasil või kiirendatud "libisemistesti". See meetod põhineb koagulaasaktiivsete stafülokokkide võimel kleepuda vereplasmaga ja seda koaguleerida. Koagulaasnegatiivsetel tüvedel seda omadust ei ole. Reaktsiooni läbiviimiseks võtke tilk vett, suspendeerige selles katsekultuur ja lisage seejärel üks tilk lahjendatud küüliku või inimese vereplasmat. 15-60 sekundi pärast moodustub plasma tromb. Hilisemat (hiljem kui minuti) reaktsiooni peetakse kahtlaseks ja reaktsiooni, mis tekkis 3 minuti pärast, loetakse negatiivseks.
NEKROTOKSIINI MÄÄRAMINE viiakse läbi 0,2 ml 2 miljardi stafülokoki agarkultuuri 2 miljardi suspensiooni nahasisese süstimise teel küülikule. Looma jälgimine toimub 24-48 tunni jooksul. Positiivseks reaktsiooniks loetakse ainult kollaka keskosa, tumeda serva ja helepunase äärega infiltraati piki perifeeriat koos järgnevate nekroosinähtustega.
STAFÜLOKOKOKI PATOGEENSUSE TÄIENDAVATE NÄITAJATE MÄÄRAMINE
HÜALURONIDAASI ENSÜÜMI MÄÄRAMINE viiakse läbi kultuuri testimisega hüaluroonhapet sisaldaval substraadil. Viimasena kasutatakse väljavõtet vastsündinu nabanöörist. Selleks pestakse 0,5% karboolhappe lahusesse kogutud nabanöörid koguses 3-5 tükki, pestakse verest põhjalikult destilleeritud veega, puhastatakse veresoontest, tükeldatakse peeneks ja lastakse kaks korda läbi hakklihamasina. Seejärel saadud hakkliha kaalutakse ja valatakse pooleteise mahu destilleeritud veega, seejärel jäetakse see 30 minutiks toatemperatuurile, aeg-ajalt loksutades. Seejärel valatakse kogu see mass 2-3 kihi steriilse marliga lehtrisse, filtreeritakse, pressitakse, visatakse minutiks keevasse vette, mis vastab kvantitatiivselt purustatud köite esialgsele kaalule. Lase keema. Vedelik filtreeritakse kiiresti läbi kahekordse steriilse marli kihi steriilsetesse katsutitesse ning igasse neist lisatakse konserveerimiseks ja substraadiks paar tilka kloroformi. Seejärel suletakse torud vatikorgiga ja asetatakse säilima külma. Ekstrakt jääb nendes tingimustes peaaegu muutumatuks mitu kuud.
Hüaluronidaasi test viiakse läbi kahes etapis. Esimene neist on hüaluroonhappe tööannuse määramine (katse tehakse ainult üks kord pärast ekstrakti valmistamist ja seda korratakse 1-2 korda kuus pikaajalisel säilitamisel), teine on hüaluronidaasi tuvastamine. ensüüm.
| Hüaluroonhappe tööannuse ja tiitri määramise skeem | ||||||
| Reaktiivid | Katseklaasid ja nende sisu ml-des | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| Hüaluroonhappe ekstrakt | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 |
| Dieet. vesi või nat. lahendus | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,4 |
| Termostaati +37 °C juures 15 min. | ||||||
| 15% äädika lahus. hape (indikaator) | 2 kuni | 2 kuni | 2 kuni | 2 kuni | 2 kuni | 2 kuni |
| Tulemus (hüübe moodustumine | - | + | + | + + | + + + | + + + + |
Torud asetatakse 15 minutiks 37 °C termostaadi, seejärel lisatakse 2-3 tilka 15% äädikhappe lahust, loksutatakse õrnalt ja tulemusi loetakse trombi moodustumisega. Hüaluroonhappe tiitriks loetakse selle minimaalne kogus, mis äädikhappe toimel annab selge trombi. Selles näites on hüaluroonhappe substraadi tiiter 0,2 ml. Tööannusena võetakse sama kogus.
Kultuuride hüaluronidaasi aktiivsuse määramise skeemid, vt allpool.
Kogu torude sisu segatakse, asetatakse esmalt 15 minutiks termostaadi, seejärel 5 minutiks külma ja lisatakse 2-3 tilka 15% äädikhapet. Hüaluronidaasi olemasolu bakterites registreeritakse trombi puudumisega uuritavas proovis. Terve hüaluroonhappe olemasolu tõttu peaks kontrollkatsutisse tekkima korralik tromb.
Katsekultuuri hüaluronidaasi aktiivsuse täpsemaks kvantitatiivseks määramiseks paigutatakse proov vastavalt järgmisele üksikasjalikule skeemile.
| Kultuuride hüaluronidaasi aktiivsuse määramise skeem | ||
| Komponendid | Katseklaasid | |
| 1 | 2 | |
| (peamine näidis) | hüaluronidaashappe kontroll | |
| Hüaluroonhappe ekstrakt tööannuses (ml) | 0,2 ml | 0,2 ml |
| Filtraat – ensüüm või 2 miljardit mikroobide suspensiooni soolalahuses (ml.) | 0,3 ml | - |
| Destilleeritud. vesi või nat. lahus (ml) | 0,2 | 0,5 ml |
| Termostaadis +37 °C juures 15-30 minutit, seejärel 5 minutit külmas, et ensüümi toime peatada | ||
| 15% äädikhappe lahus | 2 tilka | 2 tilka |
| Hüaluronidaasi aktiivsuse kvantitatiivse määramise skeem | ||||||
| Komponendid ml-des | Katseklaasid | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| hüaluroonhappe kontroll | ||||||
| Hüaluroonhappe ekstrakt orjas. annus (ml) | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Bakterite suspensioon 2 miljardit (ml) | 0,5 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0,1 | - |
| Destilleeritud. vesi või nat. lahus ml-des | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | 0,7 |
| Hoida termostaadis, lisada külmas indikaator 15% äädikhapet | ||||||
| Tulemus (hüübe moodustumine) | - | - | - | + | + | + |
Kultuuri hüaluronidaasi aktiivsuse tiiter selles näites on 0,3 ml.
FIBRINOKINAASI MÄÄRAMINE põhineb stafülokoki võimel lüüsida värske vere fibriini trombe. Testimiseks võtke 0,5 ml stafülokokkide päevast puljongikultuuri, lisage 0,2 ml värskele inimese plasmale või verele 0,8 ml soolalahusega. Seejärel segage ettevaatlikult pärast 0,5 ml 0,25% kaltsiumkloriidi lahuse lisamist. Selle reaktsiooni kontrolliks on katseklaas, millel on kõik samad komponendid, kuid ilma bakteriteta. Torud asetatakse termostaadi temperatuurile 37 ° C. Koagulatsioon toimub esimese 15 minuti jooksul. Sellest hetkest alates jälgitakse moodustunud trombi lahustumise kulgu. Tavaliselt tagavad patogeensed kultuurid täieliku fibrinolüüsi 24 tunni jooksul.
KESKKONNAS TILTAJATE ERITAMINE ON CHEPMEN. Söötme valmistamine: 1 liitrile 3,5% MPA-le lisatakse 3,3 ml emajuurvioleti või kristallvioleti 0,1% vesilahust. Valmistatud sööde valatakse tassidesse. Pärast tahkumist on sellel hallikas-lilla värvus. Patogeensed stafülokokid annavad sellele lillad või oranžid kolooniad, mittepatogeensed - valged või lillad.
PATOGEENSE STAFÜLOKOKKUSE ERIMINE MANNITOOLI OSAS viiakse läbi vedelal Gyos söötmel, mis sisaldab 0,5% mitmehüdroksüülset alkoholi - mannitooli. Mannitool hävitab patogeensed stafülokokid 36 tunni pärast, mittepatogeensed palju hiljem. See märk on väga ebastabiilne ega ole iseseisev patogeensuse näitaja.
KIIRENDATUD BAKTERIOLOOGILINE ISOLATSIOONI MEETOD
JA PATOGEENSE STAFÜLOKOKKI IDENTIFITSEERIMINE PETER DANILI JÄRGI
Meetod põhineb tavapärase vere MPA kombineeritud kasutamisel lamba erütrotsüütidega ning mannitooli, naatriumkloriidi ja kaaliumtelluriidiga söötmega, mille retsepti töötas välja Petru Danila.
SEEDE PETRO DANIL ON JÄRGMISE KOOSTIS: destilleeritud vesi - 100 ml; peptoon - 0,5 g; naatriumkloriid - 10 g; mannitool või laktoos, 0,5 g; kaaliumtelluriit - 0,5 g; bromtimoblau - 0,004 g.
Söötme valmistamine: peptoon ja sool lahustada soojas vees, lisada 2 ml bromotümolbau lahust (0,1 g 3,2 ml N/20 naatriumhüdroksiidi lahuse kohta ja 50 ml destilleeritud vett), steriliseerida +120 °C juures 15 minutit. Pärast jahutamist lisage 5 ml keetmisega steriliseeritud 10% mannitooli või laktoosi vesilahust ja 5 ml autoklaavis steriliseeritud naatriumtelluriidi 1% vesilahust. Sööde on tumeroheline, pH -7,6. Kui värvus on sinine, lisatakse sellele paar tilka 10% vesinikkloriidhapet. Sööde valatakse katseklaasidesse, 1-2 ml.
Petru Danili söötme kollasus 24 tundi pärast külvamist ja hemolüüs stafülokoki kolooniate ümber näitavad patogeensete bakterite vabanemist.
PATOGEENSE STAFÜLOKOKUSE KIIRENDATUD KÕIGE IDENTIFITSEERIMINE PETER DANILI JÄRGI
Patogeensete stafülokokkide diferentseerimine viiakse läbi ühes katseklaasis. Meetod põhineb patogeensete stafülokokkide võimel aglutineerida inimese plasma juuresolekul, koaguleerida seda ja põhjustada ka homoloogsete erütrotsüütide aglutinatsiooni. Testi läbiviimiseks lisatakse 1 ml nitraadi inimese plasmale 10 ml füsioloogilist lahust ja 0,05 ml plasma alla settinud erütrotsüütide massi. Katseklaasi loksutatakse ja 0,5 ml segu valatakse teise katsutisse. Siin tutvustatakse nii palju kui võimalik stafülokoki kultuuri, mis hõõrutakse ettevaatlikult katseklaasi seinale vedela substraadi lähedale, puudutades kergelt selle pinda. Jahvatamist jätkatakse kuni homogeense suspensiooni saamiseni. Patogeenne staphylococcus aureus aglutineerub plasmaga ja homogeniseerumist ei toimu, mittepatogeenne - moodustab ühtlase homogeense massi.
Patogeensed stafülokokid, kui kultuur hõõruda plasma substraadis, moodustavad granuleeritud ebahomogeense suspensiooni ning pärast termostaadis inkubeerimist põhjustavad erütrotsüütide hemaglutinatsiooni ja plasma koagulatsiooni. Sel juhul moodustavad mittepatogeensed templid ühtlase häguse suspensiooni ning plasma koagulatsiooni ja erütrotsüütide adhesiooni ei toimu.
| Tab. 1. Faagide tüübid | |
| Grupp | Bakteriofaagid |
| ma | 29, 52, 52A, 79, 80 |
| II | 3A, 3B, 36, 55, 71 |
| III | 6, 7, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A |
| IV | 42D |
| V | 81 ja 187 |
STAFÜLOKOKI FAGOTÜÜPIMINE
Erinevates paikkondades ringlevad erinevat tüüpi stafülokokid. Seetõttu on nende määramisel stafülokoki kultuurides suur tähtsus võimaliku nakkusallika ja selle levikuteede selgitamisel.
Rahvusvahelise fageotüpiseerimise komitee nomenklatuuri järgi eristatakse plasma hüübivate stafülokokkide hulgas 22 tüüpi faage (tabel 1):
Stafülokokkide lüüsitavuse määramine nimetatud bakteriofaagide abil viiakse läbi järgmiselt.
PILTAJATE ETTEVALMISTAMINE FAGOTÜÜPIMISEKS
FAGOTÜÜPIMINE
Positiivseks tulemuseks loetakse, kui lüüsi aste on määratud vähemalt 2 plusspunktiga. Sel juhul moodustab lüüsitsoon umbes 50% bakteriofaagi manustamiskoha pindalast.
Paljudel juhtudel lüüsitakse stafülokoki kultuure mitte ühe, vaid mitme faagi poolt, moodustades steriilsetest täppidest omamoodi fagomosaiigi. Stafülokokid, millel on sama mosaiik või erinevad 1 faagi võrra, loetakse identseteks.
BIOLOOGILINE MEETOD
Bioloogilise diagnostika meetodit kasutatakse vaid juhul, kui on kahtlus enterotoksiini vabastavatest enterotroopsetest stafülokokkidest põhjustatud toidumürgistuse suhtes. Selle põhimõte taandub stafülokoki nakatumise kahtlusega toidujäänuste, isoleeritud kultuuri ja pesuvee toitmisele. Parim bioloogiline mudel on 1,5-2 kuu vanused kassipojad (kultuuriuuringute jaoks) ja täiskasvanud kassid (enterotoksiini tuvastamisel). Stafülokoki tilgutiga nakatumise korral seda meetodit ei kasutata.
Allikas: Motavkina N.S., Pyanova R.E. Mõne piisknakkuse ja toksoplasmoosi mikrobioloogiline diagnostika. Metoodiline arendus õpilastele. VSMU, 1973
Staphylococcus aureus'e avastas 1878. aastal R. Koch ja 1880. aastal L. Pasteur mädasest materjalist. L. Pasteur, olles nakatanud küüliku, tõestas lõpuks stafülokoki rolli mädapõletiku tekitajana. Nime "stafülokokk" andis 1881. aastal A. Ogston (rakkude iseloomuliku paigutuse tõttu) ja 1884. aastal kirjeldas F. Rosenbach selle omadusi üksikasjalikult. Stafülokokid on grampositiivsed korrapärased geomeetrilised sfäärilised rakud läbimõõduga 0,5 - 1,5 mikronit, mis paiknevad tavaliselt kobaratena (vt värv sh. joon. 92), katalaaspositiivsed, redutseerivad nitraate nitrititeks, hüdrolüüsivad aktiivselt valke ja rasvad, fermenteerivad glükoosi anaeroobsetes tingimustes, et moodustada hape ilma gaasita. Tavaliselt võivad nad kasvada 15% NaCl juuresolekul ja temperatuuril 45 °C. G + C sisaldus DNA-s on 30 - 39 mol%. Stafülokokkidel puuduvad vibud, nad ei moodusta eoseid. Nad on looduses laialt levinud. Nende peamine reservuaar on inimeste ja loomade nahk ning nende limaskestad, mis suhtlevad väliskeskkonnaga. Stafülokokid on fakultatiivsed anaeroobid, ainult üks liik ( Staphylococcus saccharolyticus) On range anaeroobne. Stafülokokid ei ole toitekeskkonna suhtes nõudlikud, kasvavad hästi tavalisel söötmel, optimaalne kasvutemperatuur on 35–37 °C, pH 6,2–8,4. Kolooniad on ümmargused, läbimõõduga 2–4 mm, siledate servadega, kumerad, läbipaistmatud, värvunud moodustunud pigmendi värvi. Vedelkultuuris kasvamisega kaasneb ühtlane hägusus ja aja jooksul tekib lahtine sade. Tavalisel söötmel kasvatamisel ei moodusta stafülokokid kapsleid, kuid plasma või seerumiga poolvedelas agaris süstimisel enamik tüvesid. S. aureus moodustab kapsli. Kapslivabad tüved poolvedelagaril kasvavad kompaktsete kolooniatena, kapslitüved - moodustavad hajusaid kolooniaid.
Stafülokokid on kõrge biokeemilise aktiivsusega: nad käärivad happe (ilma gaasita) vabanemisega glütseriin, glükoos, maltoos, laktoos, sahharoos, mannitool; moodustavad erinevaid ensüüme (plasma koagulaas, fibrinolüsiin, letsitinaas, lüsosüüm, aluseline fosfataas, DNaas, hüaluronidaas, telluriidi reduktaas, proteinaas, želatinaas jne). Need ensüümid mängivad olulist rolli stafülokokkide metabolismis ja määravad suuresti nende patogeensuse. Ensüümid, nagu fibrinolüsiin ja hüaluronidaas, vastutavad stafülokokkide suure invasiivsuse eest. Plasma koagulaas on nende patogeensuse peamine tegur: see kaitseb fagotsütoosi eest ja muudab protrombiini trombiiniks, mis põhjustab fibrinogeeni koagulatsiooni, mille tulemusena kaetakse iga rakk valgukilega, mis kaitseb fagotsüütide eest.
Klassifikatsioon. Perekond Stafülokokk hõlmab üle 20 liigi, mis jagunevad kahte rühma – koagulaaspositiivsed ja koagulaasnegatiivsed stafülokokid. Liikide eristamiseks kasutatakse erinevaid märke (tabel 22).
Tabel 22
Stafülokokkide peamiste tüüpide eristavad tunnused
Märge. (+) - positiivne märk; (-) - märk on negatiivne; + (-) - on püsimatu märk ;? - teadmata.
I. Koagulaaspositiivsed stafülokokid:
1.S. aureus***.
2.S. intermedius**.
3.S. hyicusa.
II. Koagulaasnegatiivsed stafülokokid:
* Patogeenne ainult inimestele.
** Patogeenne ainult loomadele.
*** Patogeenne inimestele ja loomadele.
a Mitte kõik tüved S. hyicus neil on koagulaas.
Inimesele on patogeensed peamiselt koagulaaspositiivsed stafülokokid, kuid paljud koagulaasnegatiivsed stafülokokid on samuti võimelised tekitama haigusi, eriti vastsündinutel (vastsündinute konjunktiviit, endokardiit, sepsis, kuseteede haigused, äge gastroenteriit jne). S. aureus olenevalt sellest, kes on selle peamine kandja, jaguneb see 10 ekovariks ( hominis, bovis, ovis ja jne).
Stafülokokkides on leitud üle 50 tüüpi antigeene, igaühele tekivad organismis antikehad, paljudel antigeenidel on allergeensed omadused. Spetsiifilisuse järgi jaotatakse antigeenid üldisteks (ühised kogu perekonnale Stafülokokk); ristreageerivad - inimese erütrotsüütide, naha ja neerude isoantigeenidega ühised antigeenid (nendega seostatakse autoimmuunhaigusi); liigi- ja tüübispetsiifilised antigeenid. Aglutinatsioonireaktsioonis tuvastatud tüübispetsiifiliste antigeenide järgi jagunevad stafülokokid enam kui 30 serovariandiks. Stafülokokkide tüübi määramise seroloogiline meetod ei ole aga veel laialdast kasutust leidnud. Liigispetsiifiliste hulka kuulub valk A, mis moodustub S. aureus... See valk paikneb pealiskaudselt, on kovalentselt seotud peptidoglükaaniga, selle molekulmass on umbes 42 kDa. Valk A sünteesitakse eriti aktiivselt logaritmilises kasvufaasis temperatuuril 41 ° C, on termolabiilne ja seda ei hävita trüpsiin; selle ainulaadne omadus on võime seonduda IgG immunoglobuliinide (IgG 1, IgG 2, IgG 4) Fc-fragmendiga, vähemal määral IgM ja IgA-ga. Valgu A pinnal on tuvastatud mitu piirkonda, mis võivad seonduda immunoglobuliini polüpeptiidahela piirkonnaga, mis asub CH2 ja CH3 domeenide piiril. See omadus on leidnud laialdast rakendust koagulatsioonireaktsioonis: spetsiifiliste antikehadega koormatud stafülokokid, milles aktiivsed keskused jäävad antigeeniga interaktsioonis vabaks, annavad kiire aglutinatsioonireaktsiooni.
Valgu A koostoime immunoglobuliinidega põhjustab komplemendi süsteemide ja fagotsüütide talitlushäireid patsiendi kehas. Sellel on antigeensed omadused, see on tugev allergeen ja indutseerib T- ja B-lümfotsüütide paljunemist. Selle osa stafülokokkide haiguste patogeneesis ei ole veel täielikult välja selgitatud.
Tüved S. aureus erinevad tundlikkuse poolest stafülokoki faagide suhtes. Sisestamiseks S. aureus kasutage rahvusvahelist komplekti 23 parasvöötme faagist, mis on jagatud nelja rühma:
1. rühm - faagid 29, 52, 52A, 79, 80;
2. rühm - faagid 3A, 3C, 55, 71;
3. rühm - faagid 6, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A, 84, 85;
4. rühm - faagid 94, 95, 96;
väljaspool rühmi - faag 81.
Stafülokokkide seos faagidega on omapärane: ühte ja sama tüve võib lüüsida kas üks faag või samaaegselt mitu. Kuid kuna nende tundlikkus faagide suhtes on suhteliselt stabiilne märk, on stafülokokkide faagitüübi määramisel suur epidemioloogiline tähtsus. Selle meetodi puuduseks on see, et trükkida ei saa rohkem kui 65–70%. S. aureus... Viimastel aastatel on tüpiseerimiseks saadud spetsiifiliste faagide komplekte S. epidermidis.
Stafülokoki patogeensuse tegurid. Staphylococcus aureus on ainulaadne mikroorganism. See võib põhjustada rohkem kui 100 erinevat haigust, mis kuuluvad 1968. aasta rahvusvahelise klassifikatsiooni järgi ühteteistkümnesse klassi. Stafülokokid võivad mõjutada mis tahes kude, mis tahes organit. See stafülokokkide omadus on tingitud suure hulga patogeensete tegurite kompleksi olemasolust neis.
1. Adhesioonifaktorid - stafülokokkide kinnitumine koerakkude külge on tingitud nende hüdrofoobsusest (mida kõrgem see on, seda tugevamad on kleepuvad omadused), samuti polüsahhariidide, võimalik, et ka valgu A kleepuvusomadused ja seondumisvõime fibronektiin (mõnede rakkude retseptor).
2. Erinevad ensüümid, mis mängivad "agressiivsuse ja kaitse" tegurite rolli: plasma koagulaas (peamine patogeensuse tegur), hüaluronidaas, fibrinolüsiin, DNaas, lüsosüümilaadne ensüüm, letsitinaas, fosfataas, proteinaas jne.
3. Sekreteeritud eksotoksiinide kompleks:
erütrotsüüdid, nekroos küülikule intradermaalselt manustamisel, leukotsüütide hävimine, küüliku surm intravenoossel manustamisel. Selgus aga, et selle efekti põhjustab sama tegur – membraani kahjustav toksiin. Sellel on tsütolüütiline toime erinevat tüüpi rakkudele, mis avaldub järgmiselt. Selle toksiini molekulid seonduvad esmalt sihtraku membraani tundmatute retseptoritega või imenduvad mittespetsiifiliselt membraanis sisalduvate lipiidide poolt ja moodustavad seejärel 7 molekulist koosneva seeneheptameeri, mis koosneb 3 domeenist. "Korki" ja "serva" moodustavad domeenid asuvad membraanide välispinnal ja "tüve" domeen toimib transmembraanse poorikanalina. Selle kaudu toimub väikeste molekulide ja ioonide sisenemine ja väljumine, mis põhjustab tuumaga rakkude turset ja surma ning erütrotsüütide osmootset lüüsi. Leiti mitut tüüpi inimestelt kahjustatud membraane, see lüüsib inimeste, küülikute ja jäärade erütrotsüüte. Küülikutel on surmav toime põhjustatud intravenoossel manustamisel 3–5 minuti pärast. Hemolüseerib inimeste ja paljude loomaliikide erütrotsüüte. Intravenoossel manustamisel tekib küülikul surmav toime 16–24–48 tunni pärast. Väga sageli stafülokokkide puhul ob
b) eksfoliatiivseid toksiine A ja B eristavad antigeensed omadused, seos temperatuuriga (A - termostabiilne, B - termolabiilne), nende sünteesi kontrollivate geenide lokaliseerimine (A kontrollib kromosomaalne geen, B - plasmiidigeen). Sageli samas pinges S. aureus mõlemad eksfoliatiinid sünteesitakse. Nende toksiinidega on seotud stafülokokkide võime põhjustada vastsündinutel pemfigust, bulloosset impetiigo, sarlakid lööve;
c) tõeline leukotsidiin - toksiin, mis erineb hemolüsiinidest antigeensete omaduste poolest, toimib selektiivselt leukotsüütidele, hävitades neid;
d) toksilise šoki sündroomi (TSS) põhjustav eksotoksiin. Sellel on superantigeeni omadused. TSS-i iseloomustab temperatuuri tõus, vererõhu langus, nahalööbed koos järgneva koorumisega kätel ja jalgadel, lümfotsütopeenia, mõnikord kõhulahtisus, neerukahjustus jne. Rohkem kui 50% tüvedest on võimelised seda toksiini tootma ja eritama. S. aureus.
4. Tugevad allergeensed omadused, mida omavad nii rakustruktuuri komponendid kui ka eksotoksiinid ja muud bakterite eritatavad jääkproduktid. Stafülokoki allergeenid võivad põhjustada nii hilinenud tüüpi ülitundlikkusreaktsioone (HPR) kui ka kohest tüüpi ülitundlikkusreaktsioone (HPN). Stafülokokid on peamised naha- ja hingamisteede allergiate (dermatiit, bronhiaalastma jne) süüdlased. Stafülokoki infektsiooni patogeneesi eripära ja kalduvus üleminekuks krooniliseks vormiks on juurdunud GHZ mõjust.
5. Ristreageerivad antigeenid (erütrotsüütide A ja B, neerude ja naha isoantigeenidega - autoantikehade esilekutsumine, autoimmuunhaiguste teke).
6. Fagotsütoosi inhibeerivad tegurid. Nende olemasolu võib väljenduda kemotaksise pärssimises, rakkude kaitsmises fagotsüütide imendumise eest, stafülokokkidele võime andmises fagotsüütides paljuneda ja "oksüdatiivse purske" blokeerimises. Fagotsütoosi pärsivad kapsel, proteiin A, peptidoglükaan, teikhoiinhapped, toksiinid. Lisaks kutsuvad stafülokokid esile fagotsüütilise aktiivsuse supressorite sünteesi mõnedes keharakkudes (näiteks splenotsüütides). Fagotsütoosi pärssimine mitte ainult ei takista kehal stafülokokkide puhastamist, vaid häirib ka antigeenide töötlemist ja esitlemist T- ja B-lümfotsüütidele, mis viib immuunvastuse tugevuse vähenemiseni.
Kapsli olemasolu stafülokokkides suurendab nende virulentsust valgete hiirte suhtes, muudab nad faagide toime suhtes resistentseks, ei võimalda tüpiseerimist aglutineerivate seerumitega ja varjab valku A.
Teichoiinhapped mitte ainult ei kaitse stafülokokke fagotsütoosi eest, vaid mängivad ilmselgelt olulist rolli stafülokokkide infektsioonide patogeneesis. On kindlaks tehtud, et endokardiidiga lastel leitakse 100% juhtudest teikhoehapete vastaseid antikehi.
7. Stafülokokkide mitogeenne toime lümfotsüütide suhtes (valk A, enterotoksiinid ja muud stafülokokkide eritavad tooted avaldavad seda mõju).
8. Enterotoksiinid A, B, C1, C2, C3, D, E. Neid iseloomustab antigeenne spetsiifilisus, termiline stabiilsus, vastupidavus formaliini (ei muutu toksoidiks) ja seedeensüümide (trüpsiin ja pepsiin) toimele. stabiilne pH vahemikus 4, 5 kuni 10,0. Enterotoksiinid on madala molekulmassiga valgud molekulmassiga 26–34 kDa ja millel on superantigeenide omadused.
Samuti on kindlaks tehtud, et inimestel on geneetiliselt määratud erinevusi tundlikkuses stafülokoki infektsiooni suhtes ja selle kulgemise olemuses. Eelkõige avastatakse raskeid stafülokoki mädaseid-septilisi haigusi sagedamini A- ja AB-veregrupiga inimestel, harvemini 0- ja B-grupi inimestel.
Stafülokokkide võime põhjustada toidumürgitust, näiteks mürgitust, on seotud enterotoksiinide sünteesiga. Enamasti on need põhjustatud enterotoksiinidest A ja D. Nende enterotoksiinide toimemehhanism on halvasti mõistetav, kuid see erineb teiste bakteriaalsete enterotoksiinide toimest, mis häirivad adenülaattsüklaasi süsteemi tööd. Igat tüüpi stafülokoki enterotoksiinid põhjustavad sarnast mürgistusmustrit: iiveldus, oksendamine, kõhunäärmevalu, kõhulahtisus, mõnikord peavalu, palavik, lihasspasmid. Need stafülokoki enterotoksiinide omadused tulenevad nende superantigeensetest omadustest: nad kutsuvad esile interleukiin-2 liigse sünteesi, mis põhjustab mürgistust. Enterotoksiinid stimuleerivad soolestiku silelihaseid ja suurendavad seedetrakti motoorikat. Kõige sagedamini seostatakse mürgistust stafülokokiga nakatunud piimatoodete (jäätis, saiakesed, koogid, juust, kodujuust jne) ja võiga konservide kasutamisega. Piimatoodete nakatumist võib seostada lehmade mastiidiga või inimestel toidutootmisega seotud püopõletikuliste haigustega.
Seega määrab stafülokokkide erinevate patogeensete tegurite rohkus ja nende kõrged allergeensed omadused stafülokokkide haiguste patogeneesi iseärasused, nende olemuse, lokaliseerimise, kulgemise raskusastme ja kliinilised ilmingud. Avitaminoos, diabeet, vähenenud immuunsus soodustavad stafülokokihaiguste teket.
Stafülokoki resistentsus. Bakteritest, mis ei moodusta eoseid, on stafülokokid, nagu ka mükobakterid, välistegurite suhtes kõige vastupidavamad. Nad taluvad hästi kuivamist ning püsivad kuivas peentolmus, mis on tolmuinfektsiooni allikas, elujõulised ja virulentsed nädalaid ja kuid. Otsene päikesevalgus tapab neid vaid paljudeks tundideks, samas kui hajutatud valgus mõjub väga nõrgalt. Nad on vastupidavad ka kõrgetele temperatuuridele: kuumutamine kuni 80 ° C talub umbes 30 minutit, kuiv kuumus (110 ° C) tapab need 2 tunni jooksul; taluvad hästi madalaid temperatuure. Tundlikkus keemiliste desinfektsioonivahendite suhtes on väga erinev, näiteks tapab 3% fenooli lahus need 15-30 minutiga ja 1% kloramiini vesilahus - 2-5 minutiga.
Epidemioloogia tunnused. Kuna stafülokokid on naha ja limaskestade püsivad elanikud, võivad nende põhjustatud haigused olla kas autoinfektsioon (naha ja limaskestade erinevate vigastustega, sh mikrotraumadega) või eksogeenne kontakt-leibkonna infektsioon, õhus levivad tilgad, õhus levivad tolmu või toiduga (toidumürgituse korral) nakatumise meetodid.
Patogeensete stafülokokkide kandmine on eriti oluline, kuna kandjad, eriti meditsiiniasutustes (erinevad kirurgiakliinikud, sünnitushaiglad jne) ja suletud rühmades, võivad põhjustada stafülokoki infektsioone. Patogeensete stafülokokkide kandumine võib olla ajutine või katkendlik, kuid isikud, kellel see on alaline (residentide kandjad), kujutavad endast erilist ohtu teistele. Sellistel inimestel püsivad stafülokokid nina ja kurgu limaskestadel pikka aega ja suurel hulgal. Pikaajalise vedamise põhjus pole päris selge. See võib olla kohaliku immuunsuse nõrgenemise (sekretoorse IgA puudumine), limaskesta talitlushäirete, stafülokoki kleepuvusomaduste suurenemise või mõne muu selle omaduse tagajärg.
Patogeneesi tunnused ja kliiniline pilt. Stafülokokid satuvad kehasse kergesti läbi väikseimate naha- ja limaskestade kahjustuste ning võivad põhjustada mitmesuguseid haigusi – juveniilsest aknest (aknest) kuni raske peritoniidi, endokardiidi, sepsise või septikopeemiani, mille puhul suremus ulatub 80%-ni. Stafülokokid põhjustavad keemist, hüdradeniiti, abstsessi, flegmoni, osteomüeliiti; sõjaajal - haavade mädaste tüsistuste sagedased süüdlased; stafülokokid mängivad mädaste operatsioonide puhul juhtivat rolli. Omades allergeenseid omadusi, võivad need põhjustada psoriaasi, hemorraagilist vaskuliiti, erüsiipeleid, mittespetsiifilist polüartriiti. Toidu stafülokokkinfektsioon on tavaline toidumürgituse põhjus. Stafülokokid on sepsise peamised süüdlased, sealhulgas vastsündinutel. Erinevalt baktereemiast (veres leiduvad bakterid), mis on haiguse sümptom ja mida täheldatakse paljude bakteriaalsete infektsioonide korral, on sepsis (septitseemia - mädanemine) iseseisev haigus, millel on kindel kliiniline pilt ja mis põhineb keha organite kahjustusel. retikuloendoteliaalne süsteem (mononukleaarsete fagotsüütide süsteem - SMF ). Sepsise korral tekib mädane fookus, millest haigustekitaja satub perioodiliselt vereringesse, levib kogu kehas ja mõjutab retikuloendoteliaalsüsteemi (SMF), mille rakkudes see paljuneb, vabastades toksiine ja allergeene. Sel juhul sõltub sepsise kliiniline pilt nõrgalt patogeeni tüübist, kuid selle määrab teatud elundite kahjustus.
Septikopeemia on sepsise vorm, mille puhul haigustekitaja põhjustab erinevates elundites ja kudedes mädakoldeid ehk see on mädaste metastaasidega komplitseeritud sepsis.
Baktereemia sepsise ja septikopeemia korral võib olla lühiajaline ja pikaajaline.
Infektsioonijärgne immuunsus on olemas, on see tingitud nii humoraalsetest kui ka rakulistest teguritest. Selles mängivad olulist rolli antitoksiinid, antimikroobsed antikehad, ensüümide vastased antikehad, aga ka T-lümfotsüüdid ja fagotsüüdid. Stafülokokkide vastase immuunsuse intensiivsust ja kestust ei ole piisavalt uuritud, kuna nende antigeenne struktuur on liiga mitmekesine ja ristimmuunsus puudub.
Laboratoorsed diagnostikad. Peamine meetod on bakterioloogiline; välja töötatud ja rakendatud seroloogilised testid. Vajadusel (joobe korral) kasutatakse bioloogilist proovi. Bakterioloogiliste uuringute materjaliks on veri, mäda, lima neelust, ninast, eritis haavadest, röga (stafülokoki kopsupõletikuga), väljaheited (stafülokoki koliidiga), toidumürgistuse korral - oksendamine, väljaheited, maoloputus, kahtlased toidud. . Materjal inokuleeritakse vereagarile (hemolüüs), piimasoola (piim-kollane-sool) agarile (võõrbakterite kasv on NaCl tõttu pärsitud, pigment ja letsitinaas on paremini tuvastatavad). Isoleeritud kultuur identifitseeritakse liigiomaduste järgi, tehakse kindlaks peamiste patogeensusnähtude ja tegurite olemasolu (kuldne pigment, mannitooli fermentatsioon, hemolüüs, plasma koagulaas), kontrollitakse tundlikkust antibiootikumide suhtes, vajadusel tehakse faagi tüpiseerimine. Seroloogilistest reaktsioonidest kasutatakse RPHA-d ja IFM-i mädaste-septiliste haiguste diagnoosimiseks, eelkõige teikhoehappe või liigispetsiifiliste antigeenide vastaste antikehade määramiseks.
Stafülokokkide enterotoksigeensuse määramiseks kasutatakse kolme meetodit:
1) seroloogiline - spetsiifiliste antitoksiliste seerumite abil geelis sadestamisreaktsioonis tuvastatakse enterotoksiin ja määratakse selle tüüp;
2) bioloogiline - stafülokoki puljongikultuuri filtraadi intravenoosne manustamine kassidele annuses 2 - 3 ml 1 kg kehamassi kohta. Toksiinid põhjustavad kassidel oksendamist ja kõhulahtisust;
3) kaudne bakterioloogiline meetod - stafülokoki puhaskultuuri eraldamine kahtlasest tootest ja selle patogeensustegurite määramine (enterotoksiini moodustumine korreleerub teiste patogeensete tegurite, eriti RNAaasi olemasoluga).
Lihtsaim ja tundlikum on seroloogiline meetod enterotoksiini tuvastamiseks.
Ravi. Stafülokokihaiguste raviks kasutatakse peamiselt beetalaktaamantibiootikume, mille suhtes tuleks ennekõike määrata tundlikkus. Raskete ja krooniliste stafülokoki infektsioonide korral annab positiivse efekti spetsiifiline ravi - autovaktsiini, toksoidi, stafülokokivastase immunoglobuliini (inimese), antistafülokoki plasma kasutamine.
Spetsiifiline profülaktika. Stafülokoki infektsiooni vastu kunstliku immuunsuse loomiseks kasutatakse stafülokoki toksoidi (vedel ja tablett), kuid see loob antitoksilise immuunsuse ainult stafülokokkide vastu, mida lüüsivad peamiselt I rühma faagid. Vaktsiinide kasutamine surmatud stafülokokkide või nende antigeenide vastu, kuigi see viib antimikroobsete antikehade tekkeni, kuid ainult nende serovariantide vastu, millest vaktsiin on valmistatud. Väga immunogeense vaktsiini leidmine, mis oleks tõhus mitut tüüpi patogeensete stafülokokkide vastu, on tänapäevase mikrobioloogia üks olulisemaid probleeme.
STYLAB pakub testsüsteeme Staphylococcus aureus'e sisalduse analüüsimiseks toidus ja keskkonnas mikrobioloogiliste meetoditega, samuti selle bakteri DNA määramiseks PCR abil.
Staphylococcus aureus ( Stafülokokkaureus) on üldlevinud grampositiivne liikumatu fakultatiivselt anaeroobne mitteeoseid moodustav bakter, mis kuulub koktsi-globulaarsete bakterite hulka. See mikroorganism on osa naha ja limaskestade normaalsest mikrofloorast 15-50% tervetest inimestest ja loomadest.
Mõned selle bakteri tüved on resistentsed. Tuntuim neist on metitsilliiniresistentne Staphylococcus aureus (MRSA). Pikka aega peeti seda haiglanakkuste tekitajaks, kuid alates 1990. aastate keskpaigast on see teada inimeste haigustest, kes haiglas ei viibinud. Enamasti oli tegemist mädaste nahakahjustustega, kuid kahjustuste kriimustamisel sattus MRSA vereringesse ja mõjutas teisi organeid. Metitsilliiniresistentne Staphylococcus aureus oli tundlik vankomütsiini suhtes, mürgisele antibiootikumile, mis siiski hävitab organismi.
Teine antibiootikumiresistentne bakter on vankomütsiiniresistentne Staphylococcus aureus (VRSA). Arstid ja teadlased on seda organismi oodanud alates sellest, kui nad said teada MRSA ja vankomütsiiniresistentse enterokoki (VRE) olemasolust, mis on soolestikus elutsev mittepatogeenne organism, kuna horisontaalne ülekanne võimaldas nende bakterite vahel geene vahetada. VRSA avastati esmakordselt 2002. aastal ja see oli tõepoolest resistentne kõigi sel ajal eksisteerinud võimsate antibiootikumide suhtes. Tema nõrk koht oli aga tundlikkus vana sulfoonamiidi – bactrimi – suhtes.
Staphylococcus aureus leidub pinnases ja vees, see saastab sageli toitu ning võib nakatada kõiki kudesid ja elundeid: nahka, nahaalust kudet, kopse, kesknärvisüsteemi, luid ja liigeseid jne. See bakter võib põhjustada sepsist, mädaseid nahakahjustusi ja haavapõletikke.
Staphylococcus aureuse optimaalne temperatuur on 30–37 ° C. See talub kuumutamist kuni 70-80 ° C 20-30 minutit, kuiva kuumust - kuni 2 tundi. See bakter on vastupidav kuivamisele ja sooldumisele ning on võimeline kasvama 5-10% lauasoolasisaldusega söötmetel, sealhulgas kala- ja lihabalykil ning muudel toodetel. Enamik desinfektsioonivahendeid tapab Staphylococcus aureus'e.
Staphylococcus aureus eritab väga erinevaid toksiine. Nelja tüüpi membraanitoksiinid (hemolüsiinid) tagavad hemolüüsi, lisaks põhjustab membranotoksiin α katsetes nahanekroosi ja intravenoossel manustamisel loomade surma. Kahte tüüpi eksfoliatiinid kahjustavad naharakke. Leukotsidiin (Pantoni-Valentini toksiin) põhjustab leukotsüütide, eriti makrofaagide, neutrofiilide ja monotsüütide rakkudes vee-elektrolüütide tasakaalu häireid, mis põhjustab nende surma.
Vastavalt TR CU 021/2011 ja teistele dokumentidele on koagulaaspositiivsete stafülokokkide sisaldus toidus samuti piiratud. Need on bakterid, mis toodavad koagulaasi, ensüümi, mis põhjustab vereplasma hüübimist. Lisaks S. aureus Need sisaldavad S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae, S. pseudintermedius ja S. schleiferi alamliik. koagulanid... Mõnede teadete kohaselt S. leei on ka koagulatsioonipositiivne.
Staphylococcus aureus'e määramiseks proovides kasutatakse nii mikrobioloogilisi meetodeid, sh selektiivsöödet, kui ka DNA analüüsi PCR meetodil.
