PCR diagnostika - mis see on? Polümeraasi ahelreaktsiooni olemus seisneb selles, et bioloogilise materjali uurimiseks kasutatakse spetsiaalset tüüpi markereid, mis analüüsivad kiiresti nakkusetekitajate DNA-d. Günekoloogias on naistele erinevaid PCR-analüüside meetodeid, olenevalt uuritavast materjalist (veri, uriin, määrded jne). Pärast andmete töötlemist tehakse kindlaks patogeeni tüüp (see on niinimetatud "PCR kvalitatiivne analüüs") ja/või nende kontsentratsioon - seda tüüpi uuringut nimetatakse "PCR kvantitatiivseks analüüsiks".
Testide tegemine PCR-meetodil võimaldab teil kiiresti kontrollida nakkuspatoloogia patogeene, kui seda pole võimalik teha teiste testidega (immunoloogilised, bakterioloogilised, mikroskoopiad). Kaasaegses laboridiagnostikas on PCR kõige tõhusam ja parim viis mikroobide ja viiruste DNA tuvastamiseks. Test võimaldab günekoloogil ja teistel kliiniku arstidel mitte ainult kindlaks teha naiste ja meeste haiguse põhjuseid, vaid ka jälgida protsessi kulgu ja õigesti hinnata ravi tulemust.
| Infektsioon | PCR | Hind |
| Klamüüdia (Clamidia Trachomatis) | kvalitatiivne | 450 |
| Klamüüdia | kvantitatiivne | 850 |
| Ureaplasma (U. urealiticum / U. parvum) | kvalitatiivne | 450 |
| Ureaplasma | kvantitatiivne | 750 |
| Mycoplasma hominis | kvalitatiivne | 450 |
| Mükoplasma | kvantitatiivne | 750 |
| Mycoplasma genitalium | kvalitatiivne | 450 |
| Mükoplasma | kvantitatiivne | 750 |
| Gardnerella (Gardnaerella vaginalis) | kvalitatiivne | 450 |
| Trichomonas vaginalis | kvalitatiivne | 400 |
| Trichomonas | kvantitatiivne | 850 |
| kvalitatiivne | 500 | |
| Gonokokid (Neisseria gohorrhoeae) | kvantitatiivne | 650 |
| Tsütomegaloviirus (CMV) | kvalitatiivne | 400 |
| Süüfilise (Treponema pallidum) põhjustaja | kvalitatiivne | 500 |
| Candida (Candida albicans) | kvalitatiivne | 450 |
| Candida (Candida albicans / Candida glabrata / Candida crusei) | kvalitatiivne | 750 |
| I ja II tüüpi herpesviirus (HSV) | kvalitatiivne | 450 |
| Epstein-Barri viirus | kvalitatiivne | 500 |
| Varicella-Zosteri viirus | kvalitatiivne | 350 |
| Inimese papilloomiviirused |
Kvalitatiivne PCR analüüs annab märku nakkustekitaja otsesest esinemisest inimese või looma kehas. Võite võtta peaaegu igast asukohast (suguelundite, ureetra, orofarünksi jne) määrdumise või PCR-vereanalüüsi. Günekoloogias määrdumise või kraapimise abil kontrollitakse klamüüdia, uurea ja mükoplasma, herpesviiruse, HPV ja teiste mikroobide suhtes. DNA-analüüsi tulemus antakse patsiendile labori järeldusega "tuvastatud" või "ei tuvastatud". Vereanalüüsi puhul võimaldab see väga varajases staadiumis tuvastada HIV, hepatiidi, herpese, tsütomegaloviiruse jt mikroorganismid ning mõnel juhul määrata nende genotüübi ja näidata kogust.
Kvantitatiivsed PCR analüüsid.
Uuring võimaldab mitte ainult kiiresti tuvastada soovitud geneetilist materjali, vaid ka näidata nende DNA kontsentratsiooni (kvantitatiivne PCR meetod). Patogeenide tüübi ja arvu määramine on oluline ravi otsustamisel, eriti kui tuvastatakse näiteks mükoplasma (DNA kvantifitseerimine), ureaplasma tüpiseerimine (DNA kvantifitseerimine) või, mis kõige olulisem, saab teha genotüpiseerimist ja viiruskoormuse kvantifitseerimist. HPV infektsioon.
PCR TULEMUSED
Kõigest öeldust on selge, mis on PCR-analüüs ja millised on selle testi eelised günekoloogias. Selle diagnoosi teine oluline nüanss on see, et tulemuse dešifreerimine on mitteprofessionaalile kättesaadav ja mugav. Arvestades seda, kui palju PCR-analüüse kliinikus tehakse, samuti aega, mis kulub raporti valmimiseks (labor annab info tavaliselt 1-2 päevaga), saab sellest diagnostikameetodist parim valik kõigi suuremate günekoloogiliste ja muud infektsioonid.
Kasutades naiste ja meeste määrde DNA testimise kvalitatiivset meetodit, teeb labor kahte tüüpi järeldusi:
Näidustused nende testide tegemiseks naistel on järgmised:
Kus on Moskvas parim PCR-testi tegemiseks?
Seda tüüpi günekoloogia diagnostika kuulub kaasaegsete ja kõrgtehnoloogiliste meetodite hulka. Infektsioonitestid PCR-meetodil tuleks teha kliinikus, kus on olemas kõik vajalik täielike tulemuste saamiseks. Meie meditsiinikeskuses võtavad proovid kvalifitseeritud, kogemustega günekoloogid (mitte ravikabineti keskmine personal), kasutatakse ühekordseid instrumente ja spetsiaalseid laborimaterjale ning patsientidelt saadud proovid saadetakse igapäevaselt tööle. See võimaldab teil mitte ainult kiiresti saada PCR-i tulemusi, vaid ka tagada nende usaldusväärsuse. Soovi korral täida küsitluse anonüümsus.
Kui palju PCR maksab?
Seda teenust pakuvad paljud pealinna meditsiiniasutused. Kulusid mõjutavad paljud tegurid, alates asukohast kuni sisemise hinnapoliitikani. Siiski on objektiivsed tegurid, mis määravad keskmise miinimumarvu, millest allapoole ei ole võimalik kvaliteetset ja usaldusväärset teenust nimetatud tegurite tõttu pakkuda. Moskva kliinikute PCR-diagnostika keskmine hind mõne infektsiooni korral on järgmine:
Õigete ja usaldusväärsete uurimistulemuste saamiseks peaksid tüdrukud ja naised järgima teatud reegleid, enne kui nad lähevad nakkustestile:
1-2 päeva enne testimiskülastust kliinikusse hoiduma seksuaalvahekorrast;
- hoiduda urineerimisest 1,5-2 tundi enne määrdumist;
- teostage välissuguelundite hügieeni puhta veega, ilma pesuvahenditeta, vältige pesemist;
- välistada vaginaalsete tablettide, suposiitide kasutamine;
- ärge võtke menstruatsiooni ajal PCR-analüüse;
- kui olete neitsi, hoiatage sellest günekoloogi enne läbivaatust.
PCR-testi tegemine meie kliinikus, sealhulgas anonüümselt, on üsna lihtne. Järgmisena selgitame, kuidas PCR-i naistelt ja meestelt võetakse ning kust, millistest kohtadest on see uuring kõige informatiivsem.
Naise puhul võtab analüüsi günekoloog. Tavaliselt juhtub see esmasel kohtumisel arstiga või ilma eelneva konsulteerimiseta lihtsalt infektsioonitesti saamiseks. Kõik on vastavalt teie soovidele. Ütlete välja oma soovid, milliste infektsioonide suhtes soovite end testida ja peale seda algab materjali kogumise protseduur. Patsient riietub vööst allapoole ja istub toolile. Pärast häbememokkade laiali levikut sisestab arst tuppe sobiva suurusega günekoloogilise täppi. Günekoloogid võtavad naistelt PCR-i, tavaliselt emakakaelast, aga ka kusiti. Viimasel juhul tehakse enne sondi sisestamist tuppe sisestatud sõrmega ureetra lühike massaaž. Kui PCR-testi teevad teismelised tüdrukud või neitsitüdrukud, siis peeglit ei kasutata ja eritusproovid võetakse neitsinaha või tupe vestibüüli avause kaudu. Saadud materjal asetatakse spetsiaalse söötmega suletud torusse ja saadetakse laborisse.
Selle analüüsi võtmine meestelt ei tekita erilisi raskusi. Sond sisestatakse 3-4 cm sügavusele kusiti ja keeratakse mitu korda päri- ja vastupäeva. Materjal pannakse ka katseklaasi järgnevaks diagnostikaks.
Polümeraasi ahelreaktsiooni ehk PCR meetodit kasutatakse enamiku nakkushaiguste laboratoorseks diagnoosimiseks. See võimaldab tuvastada uuritavas materjalis mikroorganismide geneetilist materjali ja seeläbi neid tuvastada.
Meetod töötati välja 1983. aastal ja 1993. aastal sai selle autor Mullis Nobeli preemia.
Igal mikroorganismide, taime või looma tüübil on ainulaadne kromosoomide komplekt. Neid moodustab DNA - desoksüribonukleiinhape. Väikesi DNA fragmente nimetatakse nukleotiidideks ja nende spetsiifiline järjestus moodustab geeni. Iga geen kodeerib ühe valgu, näiteks kollageeni, albumiini ja kõigi teiste sünteesi. Nukleotiidjärjestus on ainulaadne. Iga elusorganismi liigi jaoks on ühised DNA lõigud, mis vastutavad selle liigi ühtsuse eest.
Uurimismaterjalis sisalduva mitmesaja mikroobi DNA analüüs liigimustreid ei paljasta. Oluliste geneetiliste komponentide arvu on vaja mitu korda suurendada, mis võimaldab neid tuvastada. See probleem lahendatakse PCR-meetodi abil.
Uurimistöö on seotud molekulaarbioloogia valdkonnaga. Mikroobsele DNA-le lisatakse DNA polümeraas ja vabad nukleotiidid. Polümeraas on ensüüm, mis tagab saadaolevatest nukleotiididest soovitud piirkonna mitu koopiat. Protsessi käivitavad praimerid - ribonukleiinhappe (RNA) lühikesed ahelad, mis on kinnitatud soovitud geeni algusesse.
Analüüsiprotsess koosneb mitmest etapist, millest igaüks nõuab teatud aega ja temperatuuri. Tuhandikgrammist bakteri DNA-st saadakse mõne tunni jooksul analüüsiks vajalik kogus materjali. Kaasaegsed seadmed võimaldavad korduvalt kopeerida kasvõi ühe raku, näiteks sperma DNA-d.
Analüüsi sammud:
Analüüsi kestus on 4-5 tundi.
Polümeraasi ahelreaktsioonil on nakkusetekitajate tuvastamise traditsiooniliste meetoditega võrreldes järgmised eelised:
PCR-i puudused on peamiselt seotud selle tehnilise keerukusega:
Valenegatiivsed PCR-tulemused on põhjustatud analüüsitehnika rikkumisest ja reaktsiooni mis tahes komponendi geneetilise järjestuse muutustest. Valepositiivsed andmed ilmnevad ka siis, kui praimerite ja muude kasutatud reaktiivide nukleotiidid langevad kokku ühe mikroorganismi geeniga.
Mikroorganismi eraldamine ei näita alati, et see oli haiguse põhjustaja. Inimese DNA analüüsimisel on veel üks probleem: enamiku haiguste geneetiline alus on endiselt teadmata, mistõttu on võimatu diagnoosida mittenakkuslikke patoloogiaid mikrobioloogilisel tasandil. See meditsiinigeneetika valdkond areneb väga aktiivselt.
Enamasti kasutatakse PCR-diagnostikat nakkushaigustega inimestel haiguse põhjustanud mikroorganismi määramiseks. Seda analüüsi kasutatakse järgmistes olukordades:
PCR-reaktsiooni kasutamise väljavaated ja selle variatsioonid meditsiinis ja bioloogias haaravad kujutlusvõimet – alates uute ravimite testimisest geenitasemel kuni konkreetsete omadustega transgeensete organismide loomiseni. Sellesuunaline töö käib maailma suurimates laborites, mis aitab täiustada PCR meetodit rakendatud tasemel inimese nakkushaiguste diagnoosimisel.
Meditsiinis kasutatakse PCR meetodit tavaliselt järgmiste haiguste diagnoosimiseks ja ravi efektiivsuse hindamiseks:
3 päeva enne analüüsi peate lõpetama alkoholi joomise. Mõned ravimid, näiteks antibiootikumid, katkestatakse vastavalt arsti ettekirjutusele.
Sugulisel teel levivate infektsioonide diagnoosimiseks ettevalmistamise reeglid:
Üldised ettevalmistusreeglid:
Selle täpse, kuid kalli diagnostikameetodi usaldusväärsus sõltub nende lihtsate reeglite rakendamisest. Tulemuse sõltumatu tõlgendamine ei anna vajalikku teavet haiguse ja selle ravi kohta. Sellepärast peate pärast PCR-analüüsi andmete saamist konsulteerima arstiga.
Sugulisel teel leviva haiguse kahtluse korral saadab günekoloog, uroloog, androloog või venereoloog teid PCR-le. Hepatiidi ja HIV-nakkuse uuringu määrab nakkushaiguste spetsialist ja tuberkuloosi puhul - ftisiaater. PCR-i kasutavad oma praktikas paljude erialade arstid, näiteks onkoloogid, hematoloogid, gastroenteroloogid ja geneetikud.
Nakkushaiguste - bakteriaalsete ja viiruslike - diagnoosimine on suunatud patogeenide varajasele avastamisele, mis võimaldab määrata varajase ja tõhusaima ravi. Kõige kaasaegsem viis infektsioonide diagnoosimiseks on PCR või polümeraasi ahelreaktsioon. Mis see meetod siis on ja milleks see on mõeldud?
Iga mikroorganism ja viirus sisaldavad oma struktuuris DNA või RNA molekule. Igaühe neist on need ühendid ainulaadsed, seega kui isoleerite nukleiinhapped laste või täiskasvanute vereanalüüsis, saate diagnoosi panna absoluutse täpsusega.
Kahjuks on DNA kontsentratsioon vereproovides või muudes bioloogilistes materjalides üsna madal ja seda ei saa tavapäraste diagnostikameetoditega määrata. Selle probleemiga toimetulemiseks leiutati polümeraasi ahelreaktsioon.
PCR-i olemus seisneb vereproovi spetsiaalses töötlemises, mille tulemusena suureneb DNA molekulide kontsentratsioon selles, mille tüübi määramine võimaldab hiljem määrata patogeeni tüübi ja panna diagnoosi.
Analüüsiks valmistumisel peaksite järgima üldisi soovitusi: ärge jooge ega sööge vahetult enne vereanalüüsi. Kuigi PCR-i jaoks vere loovutamiseks ei pea te neid nõudeid rangelt järgima, kuna uuringu täpsus ei sõltu sellest, kas analüüs tehti täis või tühja kõhuga.
PCR abil saate tuvastada peaaegu kõik viirus- ja bakteriaalsed haigused. Analüüsiks ei kasutata mitte ainult verd, vaid ka muid bioloogilisi materjale: spermat, sülge, ureetra ja emakakaela määrdeid. Vereanalüüs on informatiivne, kui konkreetse haiguse põhjustaja satub inimese verre. Seetõttu on vere PCR ette nähtud järgmiste haiguste korral:
Kui võtame arvesse teiste biomaterjalide PCR-i läbiviimise võimalust, tuleks PCR-i abil tuvastatud haiguste loendisse lisada järgmine:
Praegu on eriti aktuaalne rasedate naiste vere PCR-analüüs nn: tsütomegaloviiruse, toksoplasmoosi, punetiste jne suhtes. See on tingitud asjaolust, et nimetatud haigused võivad põhjustada kõrvalekaldeid loote arengus.
PCR on kõrgtehnoloogiline uurimismeetod ja seab laboriseadmetele kõrged nõudmised. Ruum, kus analüüsi tehakse, peab olema varustatud bioloogilise filtriga, kuna õhus on pidevalt DNA molekule sisaldavad nahaosakesed ja sülg. Biomaterjalidega töötamise tehnika eiramine võib põhjustada vale tulemuse.
Selle uuringu tulemuste tõlgendamine ei ole keeruline, kuna puudub PCR-i vereanalüüsi normide tabel. Tulemuste vormil võib olla ainult kaks fraasi:
Te peaksite teadma, et PCR võib olla positiivne isegi haiguse kliiniliste sümptomite puudumisel! PCR-i vereanalüüsi tõlgendamine lastel ei erine täiskasvanute omast.
Igaüks võib testimiseks verd annetada. Uuringu otseseks näidustuseks on sugulisel teel levivate infektsioonide (gardnerelloos, HIV-nakkus) kahtlus. Juhusliku kaitsmata seksuaalse kontakti korral aitab ainult PCR varajases staadiumis diagnoosi panna, kui inimene on mõne haigusega nakatunud. Rasedad on kohustatud TORCHi kompleksi verd loovutama. Ja ka naised, ainult.
Artikli lõpus vt
Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) leiutas 1983. aastal Kary Mullis (Ameerika teadlane). Hiljem sai ta selle leiutise eest Nobeli preemia. Praegu on PCR-diagnostika üks täpsemaid ja tundlikumaid meetodeid nakkushaiguste diagnoosimiseks.
Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR)- molekulaarbioloogia eksperimentaalne meetod, meetod teatud nukleiinhappefragmentide (DNA) väikeste kontsentratsioonide oluliseks suurendamiseks bioloogilises materjalis (proovis).
PCR-meetod põhineb teatud DNA lõigu korduval kahekordistamisel ensüümide abil kunstlikes tingimustes (in vitro). Selle tulemusena toodetakse visuaalseks tuvastamiseks piisavas koguses DNA-d. Sel juhul kopeeritakse ainult määratud tingimustele vastav jaotis ja ainult siis, kui see on uuritavas valimis.
Lisaks lihtsalt DNA koopiate arvu suurendamisele (seda protsessi nimetatakse amplifikatsiooniks) võimaldab PCR teha ka palju muid geneetilise materjaliga manipuleerimisi (mutatsioonide sisseviimine, DNA fragmentide splaissimine) ning seda kasutatakse laialdaselt näiteks bioloogilises ja meditsiinipraktikas. , haiguste (pärilikud, nakkuslikud) diagnoosimiseks , isaduse tuvastamiseks, geenide kloonimiseks, mutatsioonide juurutamiseks ja uute geenide isoleerimiseks.
Spetsiifilisus ja rakendus
PCR läbiviimine
PCR-i läbiviimiseks kõige lihtsamal juhul on vaja järgmisi komponente:
PCR viiakse läbi termotsükleris – seadmes, mis tagab katseklaaside perioodilise jahutamise ja kuumutamise, tavaliselt täpsusega vähemalt 0,1°C. Reaktsioonisegu aurustumise vältimiseks lisage katseklaasi kõrge keemistemperatuuriga õli, näiteks vaseliin. Spetsiifiliste ensüümide lisamine võib suurendada PCR reaktsiooni saagist.
Reaktsiooni edenemine
Tavaliselt viiakse PCR läbi 20–35 tsüklit, millest igaüks koosneb kolmest etapist. Kaheahelalist DNA matriitsi kuumutatakse temperatuuril 94–96 °C (või 98 °C, kui kasutatakse eriti termostabiilset polümeraasi) 0,5–2 minutiks DNA ahelate eraldamiseks. Seda etappi nimetatakse denaturatsiooniks – kahe ahela vahelised vesiniksidemed hävivad. Mõnikord eelkuumutatakse reaktsioonisegu enne esimest tsüklit 2–5 minutit, et maatriks ja praimerid täielikult denatureerida.
Kui kiud on eraldunud, alandatakse temperatuuri, et praimerid saaksid seonduda üheahelalise malliga. Seda etappi nimetatakse lõõmutamiseks. Lõõmutamistemperatuur sõltub praimeritest ja valitakse tavaliselt 4–5 °C madalamal kui nende sulamistemperatuur. Lavaaeg on 0,5 - 2 minutit.
DNA polümeraas replitseerib matriitsi ahelat, kasutades praimerina praimerit. See on pikenemise etapp. Pikendustemperatuur sõltub polümeraasist. Tavaliselt kasutatavad polümeraasid on kõige aktiivsemad temperatuuril 72 °C. Elongatsiooniaeg sõltub nii DNA polümeraasi tüübist kui ka amplifitseeritud fragmendi pikkusest. Tavaliselt võetakse pikenemise ajaks üks minut tuhande aluspaari kohta. Pärast kõigi tsüklite lõppu viiakse sageli kõigi üheahelaliste fragmentide lõpuleviimiseks läbi täiendav viimane pikenemise etapp. See etapp kestab 10-15 minutit.
Materjali ettevalmistamine uuringuteks ja transportimine laborisse
Eduka analüüsi jaoks on oluline patsiendilt materjal õigesti koguda ja korralikult ette valmistada. Teadaolevalt tehakse laboridiagnostikas suurem osa vigadest (kuni 70%) just proovi ettevalmistamise etapis. Vere kogumiseks INVITRO laboris kasutatakse praegu vaakumsüsteeme, mis ühelt poolt vigastavad patsienti minimaalselt, teisalt aga võimaldavad koguda materjali nii, et see ei puutuks kokku kas personal või keskkond. See väldib materjali saastumist (saastumist) ja tagab PCR analüüsi objektiivsuse.
DNA – desoksüribonukleiinhape – bioloogiline polümeer, üks kahest nukleiinhapete tüübist, mis tagavad säilitamise, põlvest põlve edasikandmise ja elusorganismide arengu ja funktsioneerimise geneetilise programmi rakendamise. DNA peamine roll rakkudes on RNA ja valkude struktuuri kohta teabe pikaajaline talletamine.
RNA-ribonukleiinhape on bioloogiline polümeer, mis on oma keemilise struktuuri poolest sarnane DNA-ga. RNA molekul on üles ehitatud samadest monomeerüksustest – nukleotiididest – nagu DNA. Looduses eksisteerib RNA tavaliselt ühe ahelana. Mõnes viiruses on RNA geneetilise teabe kandja. Rakus mängib see olulist rolli teabe edastamisel DNA-st valku. RNA sünteesitakse DNA matriitsil. Seda protsessi nimetatakse transkriptsiooniks. DNA-s on valdkondi, mis sisaldavad kolme tüüpi RNA sünteesi eest vastutavat teavet, mis erinevad oma funktsioonide poolest: messenger või messenger RNA (mRNA), ribosomaalne RNA (rRNA) ja transport RNA (tRNA). Valkude sünteesis osalevad ühel või teisel viisil kõik kolm RNA tüüpi. Teave valgusünteesi kohta sisaldub aga ainult mRNA-s.
Nukleotiidid on nukleiinhappemolekulide põhilised korduvad ühikud, lämmastikaluse, viie süsinikusisaldusega suhkru (pentoosi) ja ühe või mitme fosfaatrühma keemilise kombinatsiooni saadus. Nukleiinhapetes sisalduvad nukleotiidid sisaldavad ühte fosfaatrühma. Neid nimetatakse nendes sisalduva lämmastikaluse järgi - adeniin (A), mis sisaldab adeniini, guaniin (G) - guaniini, tsütosiin (C) - tsütosiin, tümiin (T) - tümiin, uratsiil (U) - uratsiil. DNA sisaldab 4 tüüpi nukleotiide - A, T, G, C, RNA sisaldab ka 4 tüüpi - A, U, G, C. Kõigis DNA nukleotiidides sisalduv suhkur on desoksüriboos, RNA - riboos. Nukleiinhapete moodustumisel seostuvad nukleotiidid, moodustades molekuli suhkru-fosfaadi karkassi, mille ühel küljel on alused.
Praimer on lühike DNA, mida kasutatakse matriitsi ahela replikatsiooniks. Iga praimer on komplementaarne kaheahelalise matriitsi ühe ahelaga, raamides amplifitseeritud piirkonna alguse ja lõpu.
Selles jaotises olevat teavet ei saa kasutada enesediagnostikaks ja -raviks. Valu või haiguse muu ägenemise korral peaks diagnostilisi analüüse määrama ainult raviarst. Diagnoosi tegemiseks ja õige ravi määramiseks peate võtma ühendust oma arstiga.
Kirjeldus
Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) leiutas 1983. aastal Ameerika biokeemik Carey B. Mullis. 1993. aastal pälvis ta selle avastuse eest Nobeli preemia.
Tänapäeval on PCR-i kui kaasaegse molekulaarbioloogia meetodi rakendusalad äärmiselt laiad. PCR-i diagnostikal on meditsiinipraktikas eriline koht. Ja selle põhjus on üsna lihtne: polümeraasi ahelreaktsioon muudab võimatu võimalikuks.
PCR-diagnostikat kirjeldatakse sageli piltlikult kui meetodit, mille abil saate heinakuhjast nõela leida ja seejärel neist nõeltest heinakuhja ehitada. "Nõel" on väike tükk raku geneetilisest materjalist (DNA või RNA).
Seega on selle meetodi avastamine viimaste aastakümnete üks tähelepanuväärsemaid sündmusi molekulaarbioloogia vallas. PCR-meetodi areng on võimaldanud meditsiinilisel diagnostikal üldiselt tõusta kvalitatiivselt uuele tasemele.
Meetodi aluseks on teatud DNA lõigu korduv selektiivne kopeerimine (amplifitseerimine), et saada selline kogus geneetilist materjali, millest piisab visuaalseks tuvastamiseks. Sel juhul kopeeritakse (amplifitseeritakse) mitu korda ainult teatud DNA osa, eeldusel, et see on uuritavas biomaterjalis olemas.
Lisaks võimaldab uuring lisaks lihtsalt DNA lõikude koopiate arvu suurendamisele ka muid geneetilise materjaliga manipuleerimisi. Seetõttu kasutatakse meetodit laialdaselt teadusuuringutes, bioloogilises ja meditsiinipraktikas: nakkus- ja pärilike haiguste diagnoosimisel, mutatsioonide tuvastamisel, genotüpiseerimisel, isaduse tuvastamisel, isikutuvastamisel jne.
Tänapäeval on infektsioonide PCR-diagnostika üks täpsemaid, tundlikumaid ja tõhusamaid kliinilisi laboratoorseid meetodeid. Pealegi on avastatud patogeenide hulk praktiliselt piiramatu – töötataks välja soovitud patogeeni PCR-analüüsi testsüsteem.
Tänu oma kõrgele tundlikkusele võimaldab PCR tuvastada patogeeni isegi selle minimaalse sisalduse korral (see tähendab, et uuritavas biomaterjalis on vaid mõned selle DNA molekulid).
PCR tuvastab nakkushaiguste patogeenid, kui seda ei saa teha muude meetoditega (immunoloogilised, kultuurilised, mikroskoopilised). Seetõttu on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodist saanud mitmete nakkusetekitajate jaoks "kuldstandard", mis on ajaliselt testitud ja kliiniliselt testitud. Kaasaegses nakkushaiguste laboratoorses diagnostikas on PCR kõige tundlikum ja spetsiifilisem meetod patogeenide otseseks tuvastamiseks. See võimaldab mitte ainult kindlaks teha haiguse etioloogiat, vaid ka jälgida nakkusprotsessi kulgu ja hinnata ravi efektiivsust.
STI-de testimine PCR-meetodiga on eriti oluline tingimusteta patogeensete mikroorganismide põhjustatud nakkusprotsessi asümptomaatilise kulgemise korral (klamüüdia, kvalitatiivne DNA määramine; mükoplasma, kvalitatiivne DNA määramine; gonorröa tekitaja, kvalitatiivne DNA määramine; trihhomoniaasi tekitaja, kvalitatiivne DNA määramine) . Näiteks naiste kroonilise gonorröa korral ei ole isegi bakterioloogilist meetodit kasutades sageli võimalik gonokokke tuvastada, hoolimata emakakaela või kusiti kroonilise põletikulise protsessi sümptomitest.
Kaasaegne PCR-diagnostika võimaldab mitte ainult tuvastada nakkusetekitajate geneetilist materjali, vaid ka määrata nende DNA/RNA kontsentratsioone (kvantitatiivne uurimisvorm). Patogeenide arvu määramine on oluline ravi otsustamisel, eriti kui tuvastatakse oportunistlikud mikroorganismid (Mycoplasma, DNA kvantitatiivne määramine; Ureaplasma tüpiseerimine, DNA kvantitatiivne määramine).
PCR-meetodi arendamise üks põhisuundi on CMD-s välja töötatud “Multiprime” formaat, mis võimaldab ühes katseklaasis tuvastada mitu patogeeni (ja üks reaktsioon).
Praegu on teada vähemalt 5 viirust, mille võime põhjustada maksakahjustusi on tõestatud. Need on A-, B-, C-, D-, E-hepatiidi tekitajad. Harvadel juhtudel võivad hepatiiti põhjustada Epstein-Barri ja herpes simplex viirused. Mitte igaüks ei tunnista tänapäeval selliste ainete nagu TT ja G-hepatiidi viiruste võimet maksa nakatada. Kõik need viirused kuuluvad erinevatesse perekondadesse, neil on erinevad bioloogilised omadused ja vastavalt sellele on ka ravitaktika olenevalt hepatiidi etioloogiast oluliselt erinev.
Ülaltoodut arvesse võttes on väga aktuaalne probleem viirusliku hepatiidi adekvaatne etioloogiline diagnoos koos konkreetse patogeeni tuvastamisega. See on võimatu ilma kaasaegsete molekulaarbioloogiliste meetodite kasutamiseta. Seetõttu on hepatiidi diagnoosimine polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil üks olulisemaid samme haiguse põhjuse väljaselgitamisel ja edasise ravitaktika määramisel.
Praegu kasutatakse HIV-nakkuse laboratoorseks diagnoosimiseks kõige kättesaadavamat ja samal ajal tundlikumat meetodit - HIV-i antikehade tuvastamist veres ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) abil, millele järgneb positiivsete tulemuste kinnitamine. analüüs immunoblotanalüüsi (IB) abil. HIV-nakatunud inimeste tuvastamise efektiivsus selle lähenemisviisi abil võib ulatuda 99% -ni või rohkemgi.
Kuid HIV-nakkuse seroloogilisel diagnoosimisel on mitmeid piiranguid:
Seetõttu kasutatakse nüüd üha enam PCR-teste HIV-nakkuse skriinimiseks. Vastavalt HIV-nakkuse testimise metoodilistele soovitustele (Vene Föderatsiooni tervishoiu- ja sotsiaalarengu ministeeriumi poolt 6. augustil 2007 heaks kiidetud) „kui on olemas epidemioloogilised kriteeriumid, mis viitavad hiljutisele HIV-nakkuse ohule patsientidele ja samaaegselt eeldatavalt valepositiivsed või valenegatiivsed tulemused ELISA ja IB analüüsis, näiteks HIV-nakkusega emadelt sündinud laste või “seronegatiivse akna” perioodi patsientide uurimisel kasutatakse PCR meetodit, mis tuvastab HIV geenimaterjali. ...” Ja kui HIV-nakkuse diagnoos on juba kindlaks tehtud, kasutatakse PCR-analüüsi prognoosimiseks, dünaamiliseks vaatluseks ja ravi jälgimiseks.
Molekulaardiagnostika keskuses (CMD) saate teha anonüümselt HIV PCR-testi.
