100 RUR bonus za první objednávku
Vyberte typ práce Diplomová práce Semestrální práce Abstrakt Diplomová práce Praxe Článek Zpráva Recenze Práce ke zkoušce Monografie Řešení problémů Podnikatelský plán Odpovědi na otázky Kreativní práce Eseje Kresba Eseje Překlad Prezentace Psaní Ostatní Zvýšení jedinečnosti textu Disertační práce Laboratorní práce Nápověda on-line
Zjistěte cenu
Stafylokokóza v nemocnicích 40-60%
V současné době již rod Staphylococcus nepatří do čeledi Micrococcaceae (od počátku 90. let). Čeleď Micrococcaceae neexistuje (protože mezi jejími složkami neexistuje žádný genetický vztah). Sjednotili se pouze na základě grampozitivních aerobních a fakultativně anaerobních koků, rozdělených do několika rovin.
Mikrokok je geneticky příbuzný aktinomycetám.
Stafylokok je geneticky příbuzný klostridii.
Při výzkumu fusobakterií, pravotel, bakteroidů (přísných anaerobů) v prostředí bez kyslíku, pokud nepoužijete médium s antibiotiky (aminoglykosidy), tak stafylokoky (i enterobakterie) zabijí vše !!!
Způsob setí vyčerpání
Stafylokoky jsou fakultativní anaeroby. Micrococcus - přísné aeroby
Diferenciace je test s aerobním a anaerobním odbouráváním glukózy. Všechny Staphylococcus glukóza + stále pod vazelínovým olejem. Mikrokok není.
Staphylococcus - více než 30 druhů, s poddruhy - 44. Jsou rozlišovány 33 testy.
Hranicí halotolerance je prostředí s 7,5 a více % NaCl.
Mikrokok - stále roste o 6,5 % a vyšší je pouze stafylokok. (LSA - 10% NaCl). Některé typy obsahují 15% NaCl.
Mléko-sůl agar - mikrokoky rostou, protože níže NaCl.
Buržoazie - Chapmanovo médium - mannitol-solný agar (1% mannitol) - 7,5% NaCl. Manitol = mannitol jako glycerol = glycerin
Cílená izolace stafylokoka (například během sanitárních a bakteriologických studií). Žloutající zóna v důsledku tvorby kyseliny. Jako alternativu máme - ZhSA.
Tito. pokud izolujeme koky na médiu s ≥ 7,5 NaCl, pak jsou to vždy glukóza +, protože je to Staphylococcus a Micrococcus neroste
Morfologie mikrokoků je mírně odlišná od stafylokoků – kolonie i buňky větší než u stafylokoků.
Každý člověk má na kůži 7-10 druhů mikrokoků (a celkem je jich asi 15), převažuje M. luteus - velké žluté kolonie na neinhibičních médiích (starý název je air sarcins, pravé sarciny nerostou v aerobní podmínky!!!). Jsou rovnoměrně zbarveny podle Grama. Ve formě hald, sešitů, balíků. Ostatní jsou bílé, bezbarvé atd. M.livi - email bílá. M.cristi - červené kolonie.
Staphylococcus aureus podle Grama se barví nerovnoměrně (barva chintz). Svazky - často produkuje S. aureus, dále haldy, sešity, balíky atp. Stafylokoky s tekutými uskupeními - osamělé, páry, hromady.
Na médiu bez žloutku se pigment S. aureus netvoří a kolonie jsou šedé.
Karotenoidy se nerozpouštějí ve vodě a prostředí kolem kolonie se u Staphylococcus a Micrococcus nikdy nezbarví.
Angelina Hess - zavedla agar do středů v polovině 19. století
Mikrokok je také UPMF - sepse. In vitro je citlivý na všechno. U zvířat penicilin - 5 jednotek na injekci - na úrovni vynálezu penicilinu - léčí sepsi. Ale léčba in vivo je velmi obtížná. Sepse u pacientů po operaci srdečního bypassu. Pokud se dostanou do stroje srdce-plíce.
Planococcus - nemáme zájem - nejsou v mořské vodě a člověku nebezpeční
Stomatokoky - 1 typ. Rostou dobře na CA (na CA roste cokoli), ale nerostou na solných médiích. Nemají žádný zvláštní klinický význam. UPMF. Velmi vzácně způsobují záněty dásní a stomatitidu (častěji jsou však tato onemocnění způsobena anaeroby a viry).
S. aureus subsp. aureus
S. aureus subsp. anaerobius - neroste za aerobních podmínek (přísně anaerobní)
Mezi stafylokoky nejsou žádní saprofyti - vše oportunistické... Více než 86 nozologických forem onemocnění.
S. aureus a S. epidermidis – 45 % všech stafylokoků. Otrava jídlem - pouze S. aureus (S. epidermidis - může způsobit pouze u kojenců). Enterotoxiny produkuje pouze S. aureus.
Každý člověk má na kůži 10-12 druhů stafylokoků.
Přední části nosu jsou hlavním biotopem. Nejvíce jich je na jednotku plochy.
S. epidermidis může také způsobit propuknutí nozokomiálních infekcí spolu s S. aureus.
U novorozenců: konjunktivitida S. epidermidis dříve v Moskvě v 70. letech; nyní nemocniční pneumonie S. epidermidis.
Plazmidy se přenášejí rychlostí asi 2 hodiny (Staphylococcus aureus zůstal na kůži jiné osoby 2 hodiny a dostal nový plazmid).
Dopravce.
V porodnických zařízeních se rutinní studie na stafylokoky neprovádí (pouze v případě propuknutí) - objednávka 345. Chirurgický profil má zatím 720 zakázek (neprovádí se nikde ve světě). Počet stafylokokových infekcí je stejný jak u „buržoazie“, tak u nás bez ohledu na sanitaci.
Podle testovacích systémů lze rozlišit až 12-15 typů stafylokoků a několik typů mikrokoků.
691 objednávek - pro porodnice zrušeno. Nová objednávka 345 nemá bakteriologickou část, proto se v bakteriologii stále všichni řídí 691 objednávkami.
Rutinní vyšetření na nosičství stafylokoka bylo zrušeno.
Koaguláza-pozitivní stafylokoky jsou nyní 5 typů.
|
koaguláza |
sladový cukr |
flokulace |
Hemolýza na CA s lidskou krví |
||||
|
W / w den |
téměř 100% |
||||||
|
± méně než 50 % |
|||||||
|
W/W noc |
S. aureus nepodává koagulázu velmi zřídka - s primárními kultivacemi od pacienta s masivní antibiotickou terapií. Proto jsme znovu nasadili zárubeň a poté nasadili plazmu zpět. Pokud ne, není to S. aureus.
Pigment na médiu s vysokým obsahem bílkovin a světlem (YSA, syrovátkové médium s proteinem)
Mezi koaguláza-negativními stafylokoky mohou některé také tvořit pigment. S promageny - tvoří žlutý pigment na jakémkoliv médiu
Acetoin = acetylmethylkarbinol - VP (Voges-Proskauer) reakce
Jeho médium s glukózou je polotekuté. Při naočkování fyziologickým roztokem vždy pozitivní na glukózu, alespoň v horní části kolony.
Konečná negativní odpověď na polotekuté His médium s glukózou je dána až 5. den.
Pokud plyn - předpokládáme, že smíšený nebo vůbec ne stafylokok.
Polotekuté médium s mannitolem bylo vyloučeno v roce 1974 - konečná negativní odpověď byla až 5. den. Položeno pouze na šálku - odpověď ráno.
Husté médium s glycerinem (1%) (lze nahradit jakýmkoli cukrem a alkoholem). Nikdy se nepoužívají tekutá a polotekutá média pro odlišení v rámci rodů Staphylococcus a Micrococcus. Indikátor - bromthymolová modř, pH - neutrální; nebo bromkresolová červeň, bromthymolová červeň. Vyséváme plaky - až 10 kultur na misku. Radiální proužek - až 6 kultur na misku. Kolem stafylokoka - žloutnutí. Mikrokoky nevyužívají glycerin.
S. aurecularis na testovacích systémech dává 95-99% podobnost se S. aureus a lze jej odlišit pouze plazmatickou koagulační reakcí.
Koaguláza-negativní stafylokoky
Za určitých podmínek mohou produkovat pigment.
U stafylokoků není možné druhově rozlišit 1-2 testy.
Roste v plazmě ve formě Mannitolu + vloček, pouze 6-7 druhů.
|
koaguláza |
Alkalická fosfatáza |
trehalóza |
||||
|
Více než 20 % kmenů |
||||||
|
5-10% kmenů |
||||||
|
95-100% kmenů |
||||||
|
5 % kmenů |
||||||
|
S. saprophiticus |
5 % kmenů |
100 % S. aureus má hemolytickou aktivitu.
S. saprophiticus je velmi vzácný. Cystitida a uretritida u mladých žen - citlivé na antibiotika a chemoterapii
Koaguláza-negativní se nemohou stát koaguláza-pozitivními.
S. epidermidis není nikdy koaguláza pozitivní, ať už je v pořadí 720 napsáno cokoliv
Nesporová buňka může žít 10-12 dní.
Alkalická fosfatáza je charakteristická pouze pro S. epidermidis.
Alkalická fosfatáza - paranitrofenol fosfát nebo fenolftalein fosfát z ALP testů v biochemii - 50 mg na 100 ml agaru až 20 kmenů na misku.
Para-nitrofenol fosfát → para-nitrofenol (žlutý) a barva média je citronově žlutá.
Fenolftaleinfosfát → fenolftalein (bezbarvý). Alkalizuje 3-10% roztok čpavku (kapejte na víčko hrnečku) Kolonie malin.
Můžete si koupit 10% roztok fenolftaleinfosfátu. Uchováváno v lednici roky. 0,5 ml roztoku na 100 ml agaru.
S. epidermidis je přirozeně citlivý na novobiocin.
Lecitoviteláza (žloutkový faktor) - nepoužívá se v mezinárodní klasifikaci, pouze zde.
20-25 % S. epidermidis pozitivní na lecitinázu.
80 % S. aureus - lidského původu - poskytuje lecitovitelázu. Lecitináza-negativní S. aureus - ze zvířat.
Jiné stafylokoky mohou také dát. Čili pokud lecitoviteláza +, tak je to 80 % S. aureus, 20 % ostatní stafylokoky.
Kalíšky Luminal ALCA - čistící zóna (proteáza) - to pro nás není důležité.
Zákal - převládají lipázy - také nejsou důležité.
Buržoazní krevní média – z ovčích erytrocytů. Předpokládalo se, že lidské kmeny S. aureus produkují pouze α-hemotoxin, ale nyní existuje také β-hemotoxin. Lze jej rozebrat pouze na ovčích erytrocytech.
β-hemotoxin dává za den zónu neúplné hemolýzy, a pokud jej pak dáte do lednice do konce pracovního dne, zóna se úplně rozjasní.
S. aureus produkuje 2 enzymy
1) termolabilní DNáza (nukleáza) - nachází se ve všech stafylokocích a ve většině ostatních mikrobů.
2) Termostabilní DNáza (nukleáza) - dostupná pouze u S. aureus. Nezničí se varem nebo dokonce krátkodobým autoklávováním.
A podle našich zakázek se stanovuje pouze termolabilní DNáza (nemá smysl).
V ohřívaném jídle (když je skutečnost PTI skryta) je stafylokok zničen, ale toxiny zůstávají. Přítomností termostabilní DNázy lze určit, zda byl přítomen S. aureus.
Řádově vysoce polymerované DNA 1-2 mg na 1 ml média (pH = 8,0). Plaková kultura (nebo injekce). 24 hodin. Vyvíjíme, nalijeme 3N HCl do kelímku, vytvoří se sraženina DNA s HCl a tam, kde zafungovala DNáza, vidíme zónu čištění. U S. aureus je jeho poloměr 10-12 mm, u S. epidermidis je jeho poloměr 4-5 mm. Kolem otvoru s usmrcenou kulturou S. aureus - 7-8 mm.
S. epidermidis tvoří pouze termolabilní DNázu, S. aureus - obě DNázy - zóna je větší.
Strana 38 z 91
SOUKROMÁ LÉKAŘSKÁ MIKROBIOLOGIE
PATOGENNÍ COCKI
Mezi patogenní koky, které způsobují onemocnění u lidí různých klinických projevů, patří: 1) stafylokoky, 2) streptokoky, 3) pneumokoky, 4) meningokoky a 5) gonokoky.
Podle tinktorického znaku (zbarvení) je lze rozdělit do dvou podskupin: grampozitivní koky (stafylokoky, streptokoky a pneumokoky), gramnegativní koky (meningokoky a gonokoky).
Charakteristickým znakem všech patogenních koků je schopnost vyvolat hnisavé zánětlivé procesy, proto se jim také říká pyogenní (pyogenní) koky.
Nejostřeji a neustále pyogenní vlastnosti jsou vyjádřeny u stafylokoků.
STAFYLOKOKY
Morfologie a tinctoriální vlastnosti. Stafylokoky - Staphylococcus (první izolován Pasteurem v roce 1880) mají tvar pravidelných kuliček o středním průměru 0,8-0,9 mikronů. V nátěru z čisté kultury jsou stafylokoky uspořádány do hromad a shluků, připomínajících hrozny (obr. 60). V hnisu a jiném patologickém materiálu lze často najít jednotlivé koky, párové a dokonce i krátké řetězce. Dobře se malují základními anilinovými barvami, jsou grampozitivní, netvoří spory, netvoří tobolky, jsou nehybné.
Kulturní a biochemické vlastnosti. Stafylokoky dobře rostou na konvenčních živných půdách jak v přítomnosti, tak v nepřítomnosti volného kyslíku. Teplotní optimum 37°.
Rýže. 60. Staphylococcus (a) a streptokok (b) v čisté kultuře.
Rýže. 61. Kolonie stafylokoka na mezopatamiovém agaru. UV dvacet.
Rýže. 62. Výsev injekcí do želatiny.
Jednotlivé kolonie na povrchu agaru jsou kulaté disky střední velikosti, konvexní, vlhké, neprůhledné, homogenní nebo jemnozrnné struktury (viz obr. 01). Barva kolonií závisí na pigmentu produkovaném stafylokoky a může být zlatá (Staphylococcus aureus), citrónově žlutá (Staphylococcus citreus) a bílá (Staphylococcus albus). Při pruhování na šikmém agaru se vytváří bohatý růst Staphylococcus aureus, pigmentovaný.
Stafylokokové pigmenty jsou lipochromy, nerozpustné ve vodě a barví pouze kulturu, nikoli kultivační médium. Tvorba pigmentu je intenzivní, když mikroorganismy rostou v přítomnosti kyslíku, při pokojové teplotě, na světle.
Při výsevu injekcí do želatiny 2.–3. den růstu je na povrchu média patrná ztekucovací zóna. Jak kultura zkapalňuje, klesá ke dnu ve formě vatovitého sedimentu (obr. 62).
Ve vývaru poskytují stafylokoky bohatý růst. Po 24 hodinách v termostatu se vývar zakalí a na dně zkumavky se vytvoří sraženina.
Stafylokoky rychle srážejí mléko a dávají mu kyselou reakci.
Fermentuje (bez plynu) laktóza, glukóza, maltóza, mannitol. Schopnost rozkládat mannitol obvykle charakterizuje patogenní kmeny stafylokoků.
Patogenní stafylokoky na krevních agarových plotnách tvoří kolonie obklopené hemolyzační zónou a koagulují citrátovou krevní plazmu.
Odpor. Staphylococcus aureus patří mezi velmi perzistentní mikroby. Teplota 80° ho za mokra zabije do 10 minut. Teplota 70 ° stafylokoka se udržuje po dobu až 1 hodiny. Kyselina karbolová (3-5% roztok) je zabije během 15-30 minut. V hnisu dlouhodobě přetrvává staphylococcus aureus.
Toxiny, enzymy stafylokoků, jejich patogenita pro zvířata. Patogenní stafylokoky produkují řadu toxinů a enzymů. Stafylokokový hemolichin rozpouští červené krvinky. Tento toxin je termolabilní (rozkládá se při 55°), patří mezi exotoxiny a při imunizaci zvířat jím lze získat antitoxin. Filtrát stafylokokových kultur má také nekrotický a letální účinek. Nyní bylo prokázáno, že hemolyzin, nekrotoxin a letální toxin jsou součástí jediného stafylokokového exotoxinu. Tyto toxiny jsou od sebe neoddělitelné a průkaz jednoho z nich slouží jako důkaz patogenity izolovaného stafylokoka. Některé z hemolytických kmenů Staphylococcus aureus produkují enterotoxin, který způsobuje akutní gastroenteritidu. Ve filtrátech stafylokokových kultur se často nachází leukocidin, jed, který ničí leukocyty. Patogenní stafylokoky se izolují z enzymů: 1) plazmatická koagulace az y - srážecí plazma, 2) fibrinolysin - rozpouštění fibrinových sraženin, 3) hyaluronidáza - rozpouštějící kyselina hyaluronová, látka adherující prvky pojivové tkáně, 4) penicilináza - inaktivující - a 5) zóna zákalu penicilinázy kolem kolonií na agaru se žloutkem a solí (Chistovichovo médium).
Z laboratorních zvířat jsou na stafylokoka nejcitlivější králíci a v menší míře morčata a myši. U králíků se při intradermální injekci kultury objevuje výrazná nekróza, při subkutánní injekci dochází k rozvoji abscesů a infekce vysoce virulentními kmeny stafylokoků vede k sepsi a smrti zvířat. Nejcitlivější na stafylokokový enterotoxin jsou kojící koťata a mladé myši.
Klasifikace stafylokoků. Stará klasifikace stafylokoků jimi vylučovaným pigmentem (zlatá, bílá a citronově žlutá) neumožňuje správně určit jejich patogenitu. Proto je v současnosti Grossem navržená klasifikace stafylokoků považována za nejsprávnější. Podle této klasifikace jsou všechny stafylokoky rozděleny do tří skupin: patogenní, mírně patogenní a nepatogenní.
První skupina - patogenní stafylokoky:
a) na miskách s 5% krevním agarem se vytvoří čirá hemolytická zóna;
b) při intradermálním podání králíkovi způsobují jevy výrazné nekrózy, někdy končící smrtí zvířete;
c) produkují enzym plazmakoagulázu, která do 2 hodin způsobí srážení plazmy;
d) jsou přidělovány především pacientům se sepsí nebo akutní hnisavou infekcí.
Druhou skupinou jsou slabě patogenní stafylokoky:
a) na krevních agarových plotnách se vytvoří zóna mírné neúplné hemolýzy;
b) při intradermální injekci králík způsobí zarudnutí kůže v místě vpichu, někdy infiltraci, častěji bez nekrózy;
c) při inokulaci do citrátové plazmy způsobují srážení během 6 hodin a později;
d) se vylučují z povrchu kůže při folikulitidě, ze sliznic při kataru horních cest dýchacích, z povrchu ran, nikoli však z jejich hloubky.
Třetí skupinou jsou nepatogenní stafylokoky:
a) na miskách s krevním agarem nebyla zjištěna žádná hemolýza;
b) při intradermálním podání králíkovi nejsou pozorovány jevy nekrózy a infiltrace, v některých případech se objevuje zarudnutí kůže;
c) reakce srážení plazmy je negativní;
d) se trvale nacházejí na zdravé kůži, na sliznicích hltanu, nosu a ve vzduchu.
Patogeneze a nemoci u člověka. Stafylokoky jsou velmi rozšířené mikroby. Nacházejí se ve vzduchu, vodě a půdě, u člověka – téměř neustále na kůži a sliznicích. To vysvětluje skutečnost, že Staphylococcus aureus je nejčastějším původcem všech druhů hnisání. Poškození kůže a sliznic nebo snížení jejich odolnosti otevírá „bránu“ stafylokokové infekci.
Nejčastěji je postižena kůže. Stafylokoky jsou původci furunklů - hnisavého zánětu vlasových folikulů. Pokud se vředy stanou vícenásobnými, onemocnění se nazývá furunkulóza. Když se několik vředů spojí dohromady a vytvoří rozsáhlejší hnisavý infiltrát, vznikne karbunkl.
Stafylokoky se nacházejí s abscesy (abscesy), v hnisavých ranách, s katary sliznic, septikémií a septikopyémií (sepse s tvorbou hnisavých ložisek ve vnitřních orgánech). Enterotoxické kmeny Staphylococcus aureus mohou způsobit otravu jídlem. Ty jsou pozorovány v důsledku konzumace mléka a dalších mléčných výrobků infikovaných stafylokokem, koláčů se smetanou atd., protože v těchto produktech nachází stafylokok optimální podmínky pro svou reprodukci. Patogenní stafylokoky se mohou dostat do mléka buď od krav s mastitidou, nebo z rukou dojek trpících pyodermií.
Imunita. U lidí neexistuje žádná vrozená imunita vůči stafylokokům. Člověk má však vůči tomuto mikroorganismu významnou rezistenci, což se vysvětluje ochrannou úlohou kůže a přítomností protilátek v krvi.
Zjevně může proběhnout získaná imunita, o čemž svědčí zvýšení titru protilátek u pacientů a těch, kteří se uzdravili. Tato imunita je však nestabilní. Navíc bylo zaznamenáno, že mnoho lidí, kteří měli furunkulózu, má zvýšenou náchylnost ke stafylokokům.
Odolnost vůči stafylokoku může být oslabena z různých důvodů - cukrovka, trauma, vysilující onemocnění atd.
Mikrobiologická diagnostika. Studium hnisu. Nejčastěji je materiálem pro mikrobiologický výzkum hnis. Za tímto účelem se u otevřených lézí po předběžném čištění povrchu rány sterilním bavlněným tamponem odstraní výtok z hlubších částí rány. U uzavřených procesů (furuncle, absces) se za stejným účelem po dezinfekci kůže provádí punkce ohniska hnisání sterilní injekční stříkačkou. Z výsledného hnisu se udělají stěry, obarví se modrou a Gramovou barvou a podrobí se mikroskopování.
Podle umístění koků a tinktorických vlastností je obtížné odlišit stafylokoky a streptokoky, proto přistupují k bakteriologickému výzkumu, to znamená k naočkování hnisu na misky s jednoduchým krevním agarem, na agar se žloutkem a solí (viz část " Sanitární mikrobiologie", str. 454) a na obohacovacím médiu (cukrový bujón). Nasazené šálky, obrácené dnem vzhůru, a vývar se umístí do termostatu při 37 ° po dobu 1-2 dnů.
Na krevních agarových plotnách tvoří kolonie hemolytické zóny, jejichž průměr je často několikanásobek průměru kolonie. Tyto průhledné bezbarvé zóny hemolýzy byly vytvořeny v důsledku rozpouštění červených krvinek způsobené stafylokokovým hemotoxinem. Na miskách se žloutkovo-solným agarem rostou patogenní stafylokoky s tvorbou zlatého pigmentu a zakalené zóny - v podobě duhové koruny kolem kolonie. Z jedné z kolonií se připraví preparát, obarví se Gramem a podrobí mikroskopování. Detekce grampozitivních koků v přípravku, které se nacházejí ve formě hroznů, dává právo vydat přibližný pozitivní výsledek. Poté se zbytek kolonie subkultivuje na šikmém agaru, aby se získala čistá kultura. Je nutné odlišit patogenní stafylokoky od nepatogenních, tj. studovat růst na krevním agaru, žloutkovém agaru, inokulovat do nitrátové plazmy a stanovit toxicitu u zvířat.
Plazmatický koagulační test. Pro reakci plazmové koagulace G. V. Vygodchikov doporučuje následující techniku. Ze srdce králíka se odebere 10 ml krve, umístí se do zkumavky s 1 ml 5% roztoku citrátu sodného. Krev se odstředí a plazma se odsaje. Výsledná plazma se před experimentem zředí fyziologickým roztokem 1:4 a nalije do sterilních zkumavek o objemu 0,5 ml. Kolonie stafylokoků se naočkují kličkou do zkumavek s nitrátovou králičí plazmou, umístí se do termostatu při 37 ° a každé 2-3 hodiny se kontroluje srážení plazmy. Patogenní stafylokoky koagulují plazmu během 2-10 hodin, nejčastěji do 4 hodin.
Test toxikogenity. Toxicita stafylokokových kultur je určena zkušenostmi na králících a enterotoxinu - na kojených koťatech. Suspenze mikrobů ve fyziologickém roztoku se připraví z kolečka stafylokoka na šikmém agaru a nastaví se podle optického standardu s výpočtem 2 miliard mikrobiálních tělísek v 1 ml suspenze. Na boku nebo na zádech králíka se oškube vlna a zvířeti se intradermálně vstříkne 0,2 ml mikrobiální suspenze. Při pozitivní reakci se v místě vpichu vytvoří infiltrát a následně nekróza.
K detekci letálního toxinu se králíkovi intravenózně podá filtrát kultivační kultury stafylokoka v množství 0,75 ml na 1 kg tělesné hmotnosti. Smrt zvířete nastává za 15 minut.
Pro stanovení enterotoxinu jsou koťata ve věku 1,5-2 měsíce (o hmotnosti 400 g) krmena původním kontaminovaným přípravkem nebo mléčnou kulturou stafylokoka. Příznaky otravy (průjem, někdy zvracení) se objevují během 30-60 minut. Pozorování se provádí po dobu 4-6 hodin, a pokud během této doby koťata nevykazují žádnou reakci, biologický test je považován za negativní.
Krevní test. Pokud má pacient podezření na sepsi, odebere se injekční stříkačkou 10 ml krve z ulnární žíly a naočkuje se do 100-200 ml cukrového bujónu. Výsev je umístěn pro obohacení po dobu 24-48 hodin v termostatu. V pozitivním případě se médium zakalí a v nátěrech z něj se nacházejí grampozitivní koky s charakteristickým tvarem a lokalizací. Bujón se subkultivuje na misku s krevním agarem a další výzkum se provádí, jak je popsáno výše. Bujón se udržuje v termostatu po dobu 10 dnů, každé 2 dny se vysévá na 5% krevní agar.
Zkoumání jiných materiálů. Při zkoumání materiálů kontaminovaných velkým množstvím cizích mikrobů (výkaly, sputum) se doporučuje použít agar s 7,5% chloridem sodným, do kterého se přidá 10% teplého odstředěného mléka (Petrovich medium). Na takovém agaru je výrazně potlačen růst cizorodé mikroflóry.
Typování fágů. Fágová typizace využívá soubor typických stafylokokových fágů, skládající se z 21 fágů, rozdělených do čtyř skupin. Každý typický fág je schopen se množit pouze na odpovídajícím kmeni stafylokoka. Fágová typizace stafylokoků má zvláštní význam v
sanitární a bakteriologické vyšetření potravinářských výrobků k identifikaci zdroje infekce a zjištění epidemických souvislostí.
Specifická terapie a chemoterapie. Stafylokoková vakcína se široce používá k léčbě opakujících se a chronických infekcí, jako je furunkulóza. K prevenci těchto onemocnění se používá toxoid.
V léčbě stafylokokových infekcí se s úspěchem používají i chemoterapeutika sulfonamidové řady (norsulfazol, sulfodimezin aj.), antibiotika (penicilin ve velkých dávkách, erytromycin, oxacilin aj.), stafylokokový bakteriofág (u kožních lézí). U těžké stafylokokové sepse se doporučuje hyperimunní antistafylokoková plazma a gamaglobulin získaný od dárců imunizovaných toxoidem.
Rozšířené stafylokokové infekce, počínaje onemocněním horních cest dýchacích, mohou napadnout celé tělo. Materiálem pro výzkum stafylokokových infekcí mohou být vzhledem k převládající lézi některých orgánů sputum, hnis, krev, výplachy nosohltanu, výtok z močových cest, potraviny (hlavně mléčné a cukrářské výrobky), výplachy z infikovaných povrchů, zvratky, exsudáty, vybrány v přísném souladu s pravidly aspektu.
Při rozboru materiálu se používají mikroskopické, bakteriologické (izolace čisté kultury mikrobů a jejich identifikace) a biologické metody.
I. MIKROSKOPICKÁ METODA
Mikroskopická metoda má samostatný význam pouze pro aseptickou práci s materiály, které jsou u zdravého člověka sterilní (například krev, mozkomíšní mok). Detekce stafylokoků má v tomto případě nezávislou diagnostickou hodnotu. V ostatních případech se mikroskopická metoda používá jako předběžná, přibližná. Při jeho použití je nutné dbát na počet mikroorganismů v každém zorném poli (u stafylokokových onemocnění může patogenní patogen vytlačit zbytek mikroflóry a v nátěrech se nacházet v obrovském množství), velikost trsů (při vysoké patogenitě se stafylokok intenzivně dělí, jedinci se nestihnou rozptýlit a dávají velké shluky - shluky), velikost jednotlivých jedinců (patogenní stafylokoky jsou většinou velmi malé).
II. BAKTERIOLOGICKÁ METODA
Bakteriologická metoda je izolace čisté kultury patogenů a jejich identifikace.
Stafylokoky patří mezi nejčastější mikroorganismy. Nacházejí se i u zdravého člověka. Proto je pro diagnostiku onemocnění, stanovení jeho stafylokokové povahy velmi důležité prokázat patogenitu izolovaných bakterií. Řešení diagnostického problému přitom úzce souvisí s objasněním problematiky epidemiologie, léčby a prevence této infekce. Na tomto základě se bakteriologická metoda skládá z několika stupňů a směrů.
Všechny výše uvedené fáze studie jsou zobrazeny v diagramu:
Izolace čisté kultury patogenu by měla být provedena s ohledem na její kulturní charakteristiky halofility (dobrý vývoj v přítomnosti nadměrného obsahu kuchyňské soli se současným potlačením jiné mikroflóry), vysokou potřebu bílkovin a sacharidů. Toho je dosaženo použitím volitelných živných médií, která současně plní funkce diferenciální diagnostiky.
SLOŽENÍ VÝŽIVNÉHO MÉDIA PRO STAFYLOKOKY
Při provádění rozboru je nutné vzít v úvahu následující odchylky od typických charakteristik stafylokoků.
STANOVENÍ ZÁKLADNÍCH INDIKÁTORŮ VIRULENCE
Hlavními indikátory virulence stafylokoků jsou hemolytická aktivita, produkce enzymu plazmatické koagulázy a nekrotoxicita.
Při posuzování stupně patogenity kultur se hojně využívají Grossovy testy, podle kterých lze všechny stafylokoky rozdělit do tří skupin. Do první skupiny nepochybně patogenních stafylokoků patří bakterie, které mají (ostrou hemolyzační aktivitu, srážení citrátové plazmy během 1-2 hodin a mající výrazné nekrotizující vlastnosti. Druhou skupinou oportunních nebo středně patogenních stafylokoků jsou razítka, která dávají nevýznamnou hemolýzu na agaru s 5 % králičí nebo jehněčí krev, srážející plazmu po 6 hodinách a při intradermálním podání králíkovi způsobující zarudnutí a infiltraci Do třetí skupiny nepatogenních stafylokoků patří kultury, které nehemolizují erytrocyty, nesráží plazmu a nemají nekrotizující vlastnosti.
Hodnocení virulence izolovaného stafylokoka je tedy založeno na komplexním testu tří indikátorů patogenního účinku.
Zároveň existují oficiální náznaky, že při izolaci stafylokoků z produktů kyseliny mléčné, zejména těch, které jsou dlouhodobě skladovány v lednici, mohou jednotlivé známky patogenity vymizet při zachování schopnosti tvořit toxiny jako celek. V důsledku toho by stafylokoky, u kterých vypadne jeden ze známek patogenity, měly být považovány za patogenní (Instrukční dopis Erismanova institutu z roku 1967).
STANOVENÍ HEMOTOXINU se provádí přímou inokulací kultury na krevní MPA obsahující 5-10 % defibrinované králičí nebo jehněčí krve. Přídavek lidské krve je nežádoucí, protože stafylokoky vylučující alfa-hemolyzin neničí lidské erytrocyty, a proto bude úsudek o patogenitě tohoto kmene izolovaného od nemocné osoby nespolehlivý.
Někdy v důsledku variability stafylokoků a také při dlouhodobém skladování kultur v nepříznivých podmínkách je hemolytická aktivita stafylokoků oslabena nebo zcela vymizí. Pro obnovení hemolyzační schopnosti bakterií je vhodné přidat do média, na kterém se testuje hemotoxicita, redukční směs v množství 0,015 g na každých 10 ml média. Směs se skládá z jednoho dílu Na 2 SO 3 (síran sodný) a dvou dílů Na HSO 3 (hydrogensíran sodný). Rekonstituční směs se uchovává ve tmě a přidává se do roztaveného média ex tempore. Pro zachování hemolytiky exotoxinu ve stafylokokové kultuře se dále doporučuje přidat do 100 ml kultury 100 ml nasyceného roztoku Na 2 S 2 0 3 (redukční činidlo) a 250 ml nasyceného roztoku hydrochinonu (stabilizátor). filtrovat. VI Ioffe navrhuje přidat pouze 0,1 ml 1% roztoku síranu sodného Na2S03 na každých 0,4 ml, aby se obnovila hemolytická aktivita.
STANOVENÍ PLASMOKOAGULÁZY se provádí naočkováním kultury stafylokoka v úzké zkumavce 0,5 ml 5% králičí nebo lidské citrátové plazmy. Plodiny se umístí do termostatu na 6-10 hodin s registrací výsledků po 1, 2, 3 a 6 hodinách. Lidská krevní plazma poskytuje nekonzistentní výsledky a dárcovská plazma s glukózou a merthiolátem obecně není vhodná. Pokud není možné nahradit lidskou plazmu, použije se pouze po 10násobném zředění fyziologickým roztokem.
Spolu s klasickou metodou stanovení plazmatické koagulázy se využívá i plazmatická koagulační reakce na skle nebo zrychlený „slide test“. Tato metoda je založena na schopnosti koagulázou aktivních stafylokoků slepit se s krevní plazmou a koagulovat ji. Koaguláza-negativní kmeny tuto vlastnost nemají. K provedení reakce odeberte kapku vody, suspendujte v ní testovanou kulturu a poté přidejte jednu kapku zředěné králičí nebo lidské krevní plazmy. Po 15-60 sekundách se vytvoří plazmatická sraženina. Pozdější (později o minutu) reakce je považována za pochybnou a reakce, která nastala po 3 minutách, je považována za negativní.
STANOVENÍ NEKROTOXINU se provádí intradermální injekcí 0,2 ml suspenze 2 miliardy denně agarové kultury stafylokoka ve fyziologickém roztoku králíkovi. Pozorování zvířete se provádí během 24-48 hodin. Za pozitivní reakci je považován pouze infiltrát se nažloutlým středem, tmavým lemem a jasně červeným okrajem podél periferie s následnými jevy nekrózy.
STANOVENÍ DALŠÍCH UKAZATELE PATOGENICITY STAPHYLOKOKŮ
STANOVENÍ ENZYMU HYALURONIDÁZY se provádí testováním kultury na substrátu obsahujícím kyselinu hyaluronovou. Jako poslední se používá extrakt z pupeční šňůry novorozence. Za tímto účelem se pupeční šňůry v množství 3-5 kusů, shromážděné v 0,5% roztoku kyseliny karbolové, důkladně omyjí z krve destilovanou vodou, očistí se od krevních cév, jemně nasekají a dvakrát projdou mlýnkem na maso. Poté se výsledné mleté maso zváží a zalije jedním a půl objemem destilované vody a poté se nechá 30 minut při pokojové teplotě za občasného protřepání. Poté se veškerá tato hmota nalije do nálevky s 2-3 vrstvami sterilní gázy, přefiltruje, vymačká a na minutu vhodí do vroucí vody, kvantitativně odpovídající počáteční hmotnosti rozdrcených provazů. Necháme přejít varem. Kapalina se rychle přefiltruje přes dvojitou vrstvu sterilní gázy do sterilních zkumavek a do každé z nich se přidá několik kapek chloroformu pro konzervaci a substrát. Poté se zkumavky uzavřou bavlněnou zátkou a vloží do chladu, aby konzervovaly. Extrakt zůstává za těchto podmínek několik měsíců téměř nezměněn.
Hyaluronidázový test se provádí ve dvou fázích. Prvním z nich je stanovení pracovní dávky kyseliny hyaluronové (experiment se provádí pouze jednou po přípravě extraktu a při dlouhodobém skladování se opakuje 1-2x měsíčně), druhým je průkaz hyaluronidázy enzym.
| Schéma pro stanovení pracovní dávky a titru kyseliny hyaluronové | ||||||
| Reagencie | Zkumavky a jejich obsah v ml | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| Extrakt kyseliny hyaluronové | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 |
| Strava. voda nebo nat. řešení | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,4 |
| Do termostatu při +37 °C na 15 min. | ||||||
| 15% roztok octa. kyselina (ukazatel) | 2 až | 2 až | 2 až | 2 až | 2 až | 2 až |
| Výsledek (tvorba sraženiny | - | + | + | + + | + + + | + + + + |
Zkumavky se umístí na 15 minut do termostatu při 37 °C, poté se přidají 2-3 kapky 15% roztoku kyseliny octové, jemně se protřepou a výsledky se odečítají vytvořením sraženiny. Za titr kyseliny hyaluronové se považuje její minimální množství, které působením kyseliny octové dává čirou sraženinu. V tomto příkladu je titr hyaluronového substrátu 0,2 ml. Užívá se stejné množství jako pracovní dávka.
Schémata pro stanovení hyaluronidázové aktivity kultur viz níže.
Celý obsah zkumavek se promíchá, nejprve se umístí na 15 minut do termostatu, poté na 5 minut do chladu a přidají se 2-3 kapky 15% kyseliny octové. Přítomnost hyaluronidázy v bakteriích je zaznamenána nepřítomností sraženiny v testovaném vzorku. V kontrolní zkumavce by se měla objevit dobrá sraženina kvůli přítomnosti intaktní kyseliny hyaluronové.
Pro přesnější kvantitativní stanovení hyaluronidázové aktivity testované kultury se vzorek umístí podle následujícího podrobného schématu.
| Schéma pro stanovení hyaluronidázové aktivity kultur | ||
| Komponenty | Zkumavky | |
| 1 | 2 | |
| (hlavní vzorek) | kontrola kyseliny hyaluronidázy | |
| Extrakt kyseliny hyaluronové v pracovní dávce (v ml) | 0,2 ml | 0,2 ml |
| Filtrát - enzym nebo 2 miliardy suspenze mikrobů ve fyziologickém roztoku (v ml.) | 0,3 ml | - |
| Destilovaná. voda nebo nat. roztok (v ml.) | 0,2 | 0,5 ml |
| V termostatu při +37 °C po dobu 15-30 minut, poté v chladu po dobu 5 minut pro zastavení působení enzymu | ||
| 15% roztok kyseliny octové | 2 kapky | 2 kapky |
| Schéma pro kvantitativní stanovení hyaluronidázové aktivity | ||||||
| Složky v ml | Zkumavky | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| kontrola kyseliny hyaluronové | ||||||
| Extrakt kyseliny hyaluronové v otroku. dávka (v ml) | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Suspenze bakterií 2 miliardy (v ml) | 0,5 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0,1 | - |
| Destilovaná. voda nebo nat. roztok v ml | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | 0,7 |
| Uchovávejte v termostatu, v chladu přidejte indikátorovou 15% kyselinu octovou | ||||||
| Výsledek (tvorba sraženiny) | - | - | - | + | + | + |
Titr hyaluronidázové aktivity kultury v tomto příkladu je 0,3 ml.
STANOVENÍ FIBRINOKINÁZY je založeno na schopnosti stafylokoka lyzovat fibrinové sraženiny čerstvé krve. Pro testování vezměte 0,5 ml denní kultury stafylokoků z bujónu, přidejte do 0,2 ml čerstvé lidské plazmy nebo krve s 0,8 ml fyziologického roztoku. Poté jemně promíchejte, po přidání 0,5 ml 0,25% roztoku chloridu vápenatého. Kontrolou v této reakci je zkumavka se všemi stejnými složkami, ale bez bakterií. Trubky jsou umístěny v termostatu na 37 °C. Koagulace nastává během prvních 15 minut. Od tohoto okamžiku je sledován postup rozpouštění vzniklé sraženiny. Patogenní kultury obvykle poskytují kompletní fibrinolýzu během 24 hodin.
DIFERENCIACE PLODINY NA ŽIVOTNÍ PROSTŘEDÍ JE CHEPMEN. Příprava média: Do 1 litru 3,5% MPA se přidá 3,3 ml 0,1% vodného roztoku genciánové violeti nebo krystalové violeti. Připravené médium se nalije do šálků. Po vytvrdnutí má šedo-fialovou barvu. Patogenní stafylokoky na něm dávají fialové nebo oranžové kolonie, nepatogenní - bílé nebo lila.
DIFERENCIACE PATOGENNÍCH STAPHYLOKOKŮ TÝKAJÍCÍ SE MANNITOLU se provádí na tekutém Gyos médiu obsahujícím 0,5 % vícemocného alkoholu - mannitolu. Manitol ničí patogenní stafylokoky po 36 hodinách, nepatogenní mnohem později. Tento znak je velmi nestabilní a není nezávislým indikátorem patogenity.
METODA AKCELEROVANÉ BAKTERIOLOGICKÉ IZOLACE
A IDENTIFIKACE PATOGENNÍHO STAFYLOKOKA PODLE PETRA DANILA
Metoda je založena na kombinovaném použití konvenční krevní MPA s jehněčími erytrocyty a média s mannitolem, chloridem sodným a teluritem draselným, jehož recepturu vyvinul Petru Danila.
MEDIUM AŽ PETRO DANIL MÁ NÁSLEDUJÍCÍ SLOŽENÍ: destilovaná voda - 100 ml; pepton - 0,5 g; chlorid sodný -10 g; mannitol nebo laktóza, 0,5 g; telurit draselný - 0,5 g; bromtimoblau - 0,004 g.
Příprava média: pepton a sůl rozpusťte v teplé vodě, přidejte 2 ml roztoku bromothymolbau (0,1 g na 3,2 ml roztoku hydroxidu sodného N/20 a 50 ml destilované vody), sterilujte při +120 °C 15 minut. Po ochlazení se přidá 5 ml 10% vodného roztoku mannitolu nebo laktózy, sterilizovaného varem a 5 ml 1% vodného roztoku teluritu sodného, sterilizovaného v autoklávu. Médium je tmavě zelené, pH -7,6. Když je barva modrá, přidá se k ní několik kapek 10% kyseliny chlorovodíkové. Médium se nalije do zkumavek, 1-2 ml.
Zežloutnutí média na Petru Danil 24 hodin po výsevu kultury a hemolýza kolem kolonií stafylokoka svědčí o uvolnění patogenních bakterií.
RYCHLÉ KOMPLEXNÍ IDENTIFIKACE PATOGENNÍHO STAPYLOKOKU PODLE PETRA DANILA
Diferenciace patogenních stafylokoků se provádí v jedné zkumavce. Metoda je založena na schopnosti patogenních stafylokoků aglutinovat v přítomnosti lidské plazmy, koagulovat ji a také způsobit aglutinaci homologních erytrocytů. K provedení testu se do 1 ml nitrátové lidské plazmy přidá 10 ml fyziologického roztoku a 0,05 ml hmoty erytrocytů usazené pod plazmou. Zkumavka se protřepe a 0,5 ml směsi se nalije do jiné zkumavky. Zde se zavede co nejvíce kultury stafylokoka, která se opatrně rozetře o stěnu zkumavky těsně u tekutého substrátu a lehce se dotkne jejího povrchu. Tření pokračuje, dokud se nezíská homogenní suspenze. Patogenní staphylococcus aureus je aglutinován plazmou a nedochází k homogenizaci, nepatogenní - tvoří stejnoměrnou homogenní hmotu.
Patogenní stafylokoky při vtírání kultury do plazmatického substrátu tvoří granulární nehomogenní suspenzi a po inkubaci v termostatu způsobují hemaglutinaci erytrocytů a koagulaci plazmy. V tomto případě nepatogenní razítka tvoří stejnoměrnou zakalenou suspenzi, nedochází k plazmatické koagulaci a adhezi erytrocytů.
| Tab. 1. Typy fágů | |
| Skupina | Bakteriofágy |
| já | 29, 52, 52A, 79, 80 |
| II | 3A, 3B, 36, 55, 71 |
| III | 6, 7, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A |
| IV | 42D |
| PROTI | 81 a 187 |
FAGOTYPACE STAPHYLOKOKŮ
V různých lokalitách cirkulují různé fágové typy stafylokoků. Jejich stanovení ve stafylokokových kulturách má proto velký význam pro objasnění možného zdroje infekce a způsobů jejího šíření.
Mezi stafylokoky srážejícími plazmu se podle nomenklatury Mezinárodního výboru pro fageotypizaci rozlišuje 22 typů fágů (tabulka 1):
Stanovení lyzovatelné schopnosti stafylokoků jmenovanými bakteriofágy se provádí následovně.
PŘÍPRAVA PLODINY PRO FAGOTYPICI
FAGOTYPOVÁNÍ
Za pozitivní výsledek se považuje, pokud je stupeň lýzy určen alespoň 2 plusovými body. V tomto případě je zóna lýzy asi 50 % plochy v místě aplikace bakteriofága.
V mnoha případech jsou stafylokokové kultury lyžovány nikoli jedním, ale několika fágy, které tvoří jakousi fagomosaiku ze sterilních skvrn. Stafylokoky vykazující stejnou mozaiku nebo lišící se 1 fágem jsou považovány za identické.
BIOLOGICKÁ METODA
Biologická diagnostická metoda se používá pouze při podezření na intoxikaci potravinami způsobenou enterotropními stafylokoky uvolňujícími enterotoxin. Jeho princip je redukován na podávání zbytků potravy podezřelých z infekce stafylokokem, izolovanou kulturu, promývací vodu. Nejlepší biologický model jsou 1,5-2 měsíce stará koťata (pro výzkum kultury) a dospělé kočky (pokud je detekován enterotoxin). Při kapavých stafylokokových infekcích se tato metoda nepoužívá.
Zdroj: Motavkina N.S., Pyanova R.E. Mikrobiologická diagnostika některých kapénkových infekcí a toxoplazmózy. Metodický rozvoj pro studenty. VSMU, 1973
Staphylococcus aureus byl objeven v roce 1878 R. Kochem a v roce 1880 L. Pasteurem v hnisavém materiálu. L. Pasteur poté, co infikoval králíka, nakonec prokázal roli stafylokoka jako původce hnisavého zánětu. Jméno "stafylokok" dal v roce 1881 A. Ogston (kvůli charakteristickému uspořádání buněk) a v roce 1884 F. Rosenbach podrobně popsal jeho vlastnosti. Stafylokoky jsou grampozitivní, pravidelné geometrické kulovité buňky o průměru 0,5 - 1,5 mikronu, obvykle umístěné ve formě shluků (viz barva vč. obr. 92), katalázově pozitivní, redukují dusičnany na dusitany, aktivně hydrolyzují bílkoviny a tuky, fermentují glukózu za anaerobních podmínek za vzniku kyseliny bez plynu. Obvykle mohou růst v přítomnosti 15% NaCl a při 45 °C. Obsah G + C v DNA je 30 - 39 mol%. Stafylokoky nemají bičíky, netvoří spory. V přírodě jsou rozšířené. Jejich hlavním rezervoárem je kůže lidí a zvířat a jejich sliznice, komunikující s vnějším prostředím. Stafylokoky jsou fakultativní anaeroby, pouze jeden druh ( Staphylococcus saccharolyticus) Je přísně anaerobní. Stafylokoky nejsou náročné na živná média, dobře rostou na běžných médiích, optimální teplota pro růst je 35 - 37 °C, pH 6,2 - 8,4. Kolonie jsou kulaté, o průměru 2 - 4 mm, s hladkými okraji, konvexní, neprůhledné, zbarvené do barvy vytvořeného pigmentu. Růst v kapalné kultuře je doprovázen rovnoměrným zákalem a časem se tvoří sypká sraženina. Při pěstování na konvenčním médiu netvoří stafylokoky tobolky, avšak při vstříknutí do polotekutého agaru s plazmou nebo sérem většina kmenů S. aureus tvoří kapsli. Bezkapsulové kmeny na polotekutém agaru rostou ve formě kompaktních kolonií, kapslové kmeny - tvoří difúzní kolonie.
Stafylokoky mají vysokou biochemickou aktivitu: fermentují za uvolňování kyseliny (bez plynu) glycerinu, glukózy, maltózy, laktózy, sacharózy, mannitolu; tvoří různé enzymy (plazmatická koaguláza, fibrinolysin, lecitináza, lysozym, alkalická fosfatáza, DNáza, hyaluronidáza, teluritreduktáza, proteináza, želatináza atd.). Tyto enzymy hrají důležitou roli v metabolismu stafylokoků a do značné míry určují jejich patogenitu. Enzymy jako fibrinolysin a hyaluronidáza jsou zodpovědné za vysokou invazivitu stafylokoků. Hlavním faktorem jejich patogenity je plazmatická koaguláza: chrání před fagocytózou a přeměňuje protrombin na trombin, který způsobuje koagulaci fibrinogenu, v důsledku čehož je každá buňka pokryta proteinovým filmem, který chrání před fagocyty.
Klasifikace. Rod Staphylococcus zahrnuje více než 20 druhů, které se dělí do dvou skupin – koaguláza-pozitivní a koaguláza-negativní stafylokoky. K rozlišení druhů se používají různé znaky (tab. 22).
Tabulka 22
Diferenciální znaky hlavních typů stafylokoků
Poznámka. (+) - kladné znaménko; (-) - znaménko je záporné; + (-) - je nestálé znamení ;? - neznámý.
I. Koaguláza-pozitivní stafylokoky:
1.S. aureus***.
2.S. intermedius**.
3.S. hyicusA.
II. Koaguláza-negativní stafylokoky:
* Patogenní pouze pro lidi.
** Patogenní pouze pro zvířata.
*** Patogenní pro lidi a zvířata.
A Ne všechny kmeny S. hyicus mají koagulázu.
Patogenní pro člověka jsou především koaguláza-pozitivní stafylokoky, ale mnoho koaguláza-negativních stafylokoků je také schopno vyvolat onemocnění, zejména u novorozenců (neonatální konjunktivitida, endokarditida, sepse, onemocnění močových cest, akutní gastroenteritida atd.). S. aureus podle toho, kdo je jejím hlavním nositelem, se dělí na 10 ekovarů ( hominis, bovis, ovis atd.).
U stafylokoků bylo nalezeno více než 50 typů antigenů, na každý z nich se v těle tvoří protilátky, řada antigenů má alergenní vlastnosti. Podle specifičnosti se antigeny dělí na generické (společné pro celý rod Staphylococcus); zkříženě reagující - antigeny společné s izoantigeny lidských erytrocytů, kůže a ledvin (souvisejí s nimi autoimunitní onemocnění); druhově a typově specifické antigeny. Podle typově specifických antigenů detekovaných v aglutinační reakci se stafylokoky dělí na více než 30 sérovariantů. Sérologická metoda typizace stafylokoků však dosud nebyla široce používána. Druhově specifické zahrnuje protein A, který se tvoří S. aureus... Tento protein je umístěn povrchově, je kovalentně vázán na peptidoglykan, jeho molekulová hmotnost je asi 42 kDa. Protein A je zvláště aktivně syntetizován v logaritmické růstové fázi při 41 °C, je termolabilní a není ničen trypsinem; jeho unikátní vlastností je schopnost vázat se na Fc-fragment IgG imunoglobulinů (IgG 1, IgG 2, IgG 4), v menší míře na IgM a IgA. Na povrchu proteinu A bylo identifikováno několik oblastí, které se mohou vázat na oblast imunoglobulinového polypeptidového řetězce umístěného na hranici domén CH2 a CH3. Tato vlastnost našla široké uplatnění v koaglutinační reakci: stafylokoky, nabité specifickými protilátkami, ve kterých aktivní centra zůstávají volná, při interakci s antigenem poskytují rychlou aglutinační reakci.
Interakce proteinu A s imunoglobuliny vede k dysfunkci komplementových systémů a fagocytů v těle pacienta. Má antigenní vlastnosti, je silným alergenem a vyvolává množení T a B lymfocytů. Jeho role v patogenezi stafylokokových onemocnění není dosud plně objasněna.
Kmeny S. aureus se liší citlivostí na stafylokokové fágy. Pro psaní S. aureus použít mezinárodní soubor 23 mírných fágů, které jsou rozděleny do čtyř skupin:
1. skupina - fágy 29, 52, 52A, 79, 80;
2. skupina - fágy 3A, 3C, 55, 71;
3. skupina - fágy 6, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A, 84, 85;
4. skupina - fágy 94, 95, 96;
mimo skupiny - fág 81.
Vztah stafylokoků k fágům je zvláštní: jeden a tentýž kmen může být lyžován buď jedním fágem, nebo současně několika fágy. Ale protože jejich citlivost na fágy je relativně stabilním znakem, fágová typizace stafylokoků má velký epidemiologický význam. Nevýhodou této metody je, že nelze napsat více než 65 - 70 %. S. aureus... V posledních letech byly pro typizaci získány sady specifických fágů S. epidermidis.
Faktory patogenity stafylokoků. Staphylococcus aureus je unikátní mikroorganismus. Může způsobit více než 100 různých onemocnění patřících do jedenácti tříd podle Mezinárodní klasifikace z roku 1968. Stafylokoky mohou postihnout jakoukoli tkáň, jakýkoli orgán. Tato vlastnost stafylokoků je způsobena přítomností velkého komplexu patogenních faktorů v nich.
1. Adhezivní faktory - uchycení stafylokoků k tkáňovým buňkám je způsobeno jejich hydrofobicitou (čím vyšší, tím silnější adhezivní vlastnosti), dále adhezivními vlastnostmi polysacharidů, případně i proteinu A, a schopností vázat se. fibronektin (receptor některých buněk).
2. Různé enzymy, které hrají roli faktorů „agrese a obrany“: plazmatická koaguláza (hlavní faktor patogenity), hyaluronidáza, fibrinolysin, DNáza, lysozymu podobný enzym, lecitináza, fosfatáza, proteináza atd.
3. Komplex vylučovaných exotoxinů:
erytrocyty, nekróza při intradermálním podání králíkovi, destrukce leukocytů, smrt králíka při intravenózním podání. Ukázalo se však, že tento efekt způsobuje stejný faktor – toxin poškozující membránu. Má cytolytický účinek na různé typy buněk, který se projevuje následovně. Molekuly tohoto toxinu se nejprve navážou na neznámé receptory membrány cílové buňky nebo jsou nespecificky absorbovány lipidy obsaženými v membráně a poté vytvoří houbový heptamer o 7 molekulách, skládajících se ze 3 domén. Domény, které tvoří „čepku“ a „okraj“, jsou umístěny na vnějším povrchu membrán a doména „stonku“ slouží jako transmembránový kanálek pórů. Jeho prostřednictvím dochází ke vstupu a výstupu malých molekul a iontů, což vede k otoku a smrti buněk s jádrem a osmotické lýze erytrocytů. Nalezl několik typů membrán poškozených člověkem, lyžuje erytrocyty lidí, králíků a beranů. Smrtelný účinek u králíků je způsoben intravenózním podáním po 3 - 5 minutách. Hemolyzuje erytrocyty lidí a mnoha živočišných druhů. Smrtelný účinek na králíka při nitrožilní aplikaci způsobuje po 16 - 24 - 48 hod. Velmi často u stafylokoků ob
b) exfoliativní toxiny A a B se vyznačují antigenními vlastnostmi, vztahem k teplotě (A - termostabilní, B - termolabilní), lokalizací genů, které řídí jejich syntézu (A je řízena chromozomálním genem, B - plazmidovým genem). Často ve stejném kmeni S. aureus oba exfoliatiny jsou syntetizovány. S těmito toxiny je spojena schopnost stafylokoků způsobit u novorozenců pemfigus, bulózní impetigo, šarlatovou vyrážku;
c) pravý leukocidin - toxin, který se liší od hemolyzinů v antigenních vlastnostech, selektivně působí na leukocyty a ničí je;
d) exotoxin způsobující syndrom toxického šoku (TSS). Má vlastnosti superantigenu. Pro TSS je charakteristické zvýšení teploty, pokles krevního tlaku, kožní vyrážky s následným olupováním na rukou a nohou, lymfocytopenie, někdy průjmy, poškození ledvin atd. Více než 50 % kmenů je schopno produkovat a vylučovat tento toxin S. aureus.
4. Silné alergenní vlastnosti, které mají jak složky buněčné struktury, tak exotoxiny a další odpadní produkty vylučované bakteriemi. Stafylokokové alergeny jsou schopny způsobit hypersenzitivní reakce opožděného typu (HPR) i hypersenzitivní reakce okamžitého typu (HPN). Stafylokoky jsou hlavními viníky kožních a respiračních alergií (dermatitida, bronchiální astma atd.). Zvláštnost patogeneze stafylokokové infekce a její tendence k přechodu do chronické formy jsou zakořeněny v účinku GHZ.
5. Zkříženě reagující antigeny (s izoantigeny erytrocytů A a B, ledvin a kůže - indukce autoprotilátek, rozvoj autoimunitních onemocnění).
6. Faktory inhibující fagocytózu. Jejich přítomnost se může projevit v tlumení chemotaxe, ochraně buněk před absorpcí fagocyty, v poskytování stafylokoků schopností množit se ve fagocytech a blokování „oxidačního vzplanutí“. Fagocytóza je inhibována kapslí, proteinem A, peptidoglykanem, teichoovými kyselinami, toxiny. Kromě toho stafylokoky indukují syntézu supresorů fagocytární aktivity některými buňkami těla (například splenocyty). Inhibice fagocytózy nejen brání tělu očistit stafylokoky, ale také narušuje zpracování a prezentaci antigenů T- a B-lymfocytům, což vede ke snížení síly imunitní odpovědi.
Přítomnost kapsle ve stafylokocích zvyšuje jejich virulenci pro bílé myši, činí je odolnými vůči působení fágů, neumožňuje typizaci aglutinačními séry a maskuje protein A.
Teichoové kyseliny nejen chrání stafylokoky před fagocytózou, ale samozřejmě hrají zásadní roli v patogenezi stafylokokových infekcí. Bylo zjištěno, že u dětí s endokarditidou jsou protilátky proti teichoovým kyselinám nalezeny ve 100% případů.
7. Mitogenní účinek stafylokoků ve vztahu k lymfocytům (tento účinek má protein A, enterotoxiny a další produkty vylučované stafylokoky).
8. Enterotoxiny A, B, C1, C2, C3, D, E. Vyznačují se antigenní specifitou, tepelnou stabilitou, odolností vůči působení formalinu (nepřeměňují se na toxoid) a trávicích enzymů (trypsin a pepsin), jsou stabilní v rozmezí pH od 4, 5 do 10,0. Enterotoxiny jsou nízkomolekulární proteiny s molekulovou hmotností 26 až 34 kDa s vlastnostmi superantigenů.
Bylo také zjištěno, že existují geneticky podmíněné rozdíly v citlivosti vůči stafylokokové infekci a povaze jejího průběhu u lidí. Zejména těžká stafylokoková purulentně-septická onemocnění se častěji vyskytují u lidí s krevními skupinami A a AB, méně často u osob skupiny 0 a B.
Schopnost stafylokoků způsobit otravu jídlem, jako je intoxikace, je spojena se syntézou enterotoxinů. Nejčastěji jsou způsobeny enterotoxiny A a D. Mechanismus účinku těchto enterotoxinů je málo znám, ale liší se od účinku jiných bakteriálních enterotoxinů, které narušují funkci adenylátcyklázového systému. Všechny typy stafylokokových enterotoxinů způsobují podobný vzorec otravy: nevolnost, zvracení, bolest slinivky břišní, průjem, někdy bolest hlavy, horečka, svalové křeče. Tyto vlastnosti stafylokokových enterotoxinů jsou způsobeny jejich superantigenními vlastnostmi: indukují nadměrnou syntézu interleukinu-2, což způsobuje intoxikaci. Enterotoxiny stimulují hladké svaly střev a zvyšují gastrointestinální motilitu. Otrava je nejčastěji spojena s užíváním mléčných výrobků infikovaných stafylokokem (zmrzlina, pečivo, koláče, sýry, tvaroh aj.) a konzerv s máslem. Infekce mléčných výrobků může být spojena s mastitidou u krav nebo s pyozánětlivými onemocněními u lidí souvisejícími s produkcí potravin.
Hojnost různých patogenních faktorů u stafylokoků a jejich vysoké alergenní vlastnosti tedy určují zvláštnosti patogeneze stafylokokových onemocnění, jejich povahu, lokalizaci, závažnost průběhu a klinické projevy. Avitaminóza, cukrovka, snížená imunita přispívají k rozvoji stafylokokových onemocnění.
Stafylokoková rezistence. Mezi bakteriemi, které netvoří spory, mají stafylokoky, stejně jako mykobakterie, největší odolnost vůči vnějším faktorům. Dobře snášejí sušení a zůstávají životaschopné a virulentní po týdny a měsíce v suchém jemném prachu, který je zdrojem prachové infekce. Přímé sluneční světlo je zabíjí jen na mnoho hodin, zatímco rozptýlené světlo působí velmi slabě. Jsou také odolné vůči vysokým teplotám: zahřátí do 80 °C vydrží asi 30 minut, suché teplo (110 °C) je zabije do 2 hodin; dobře snášejí nízké teploty. Citlivost na chemické dezinfekční prostředky se velmi liší, například 3% roztok fenolu je zabije během 15 - 30 minut a 1% vodný roztok chloraminu - za 2 - 5 minut.
Vlastnosti epidemiologie. Vzhledem k tomu, že stafylokoky jsou stálými obyvateli kůže a sliznic, mohou jimi způsobená onemocnění být buď autoinfekce (s různými poraněními kůže a sliznic, včetně mikrotraumat), nebo exogenní infekce způsobená kontaktními domácími, vzdušnými kapénkami, vzduchem. prachové nebo alimentární (při otravě jídlem) způsoby infekce.
Přeprava patogenních stafylokoků je zvláště důležitá, protože přenašeči, zejména ve zdravotnických zařízeních (různé chirurgické kliniky, porodnice atd.) a v uzavřených skupinách, mohou způsobit stafylokokové infekce. Přeprava patogenních stafylokoků může být dočasná nebo přerušovaná, ale osoby, u kterých je trvalá (rezidentní přenašeči), představují zvláštní nebezpečí pro ostatní. U takových lidí stafylokoky přetrvávají dlouhou dobu a ve velkém množství na sliznicích nosu a krku. Důvod dlouhodobé přepravy není zcela jasný. Může to být důsledek oslabení lokální imunity (nedostatek sekrečního IgA), dysfunkce sliznice, zvýšení adhezivních vlastností stafylokoka nebo v důsledku některé z jeho dalších vlastností.
Vlastnosti patogeneze a klinický obraz. Stafylokoky se snadno dostanou do těla i přes nejmenší poškození kůže a sliznic a mohou způsobit celou řadu onemocnění – od juvenilního akné (akné) až po těžké záněty pobřišnice, endokarditidy, sepse nebo septikopyemie, u kterých úmrtnost dosahuje 80 %. Stafylokoky způsobují vředy, hydradenitidu, abscesy, flegmonu, osteomyelitidu; v době války - častými viníky hnisavých komplikací ran; stafylokoky hrají hlavní roli v purulentní chirurgii. Mají alergenní vlastnosti, mohou způsobit psoriázu, hemoragickou vaskulitidu, erysipel, nespecifickou polyartritidu. Stafylokoková infekce potravin je častou příčinou otravy jídlem. Stafylokoky jsou hlavními viníky sepse, a to i u novorozenců. Na rozdíl od bakteriémie (bakterie v krvi), která je příznakem onemocnění a je pozorována u mnoha bakteriálních infekcí, je sepse (septikémie - hniloba) samostatné onemocnění s jasným klinickým obrazem, které je založeno na poškození orgánů retikuloendoteliální systém (systém mononukleárních fagocytů - SMF ). Při sepsi vzniká hnisavé ložisko, ze kterého se patogen periodicky dostává do krevního řečiště, šíří se po těle a ovlivňuje retikuloendoteliální systém (SMF), v jehož buňkách se množí, uvolňuje toxiny a alergeny. V tomto případě klinický obraz sepse slabě závisí na typu patogenu, ale je určen porážkou určitých orgánů.
Septikopyemie je forma sepse, kdy patogen způsobuje hnisavá ložiska v různých orgánech a tkáních, to znamená, že jde o sepsi komplikovanou hnisavými metastázami.
Bakterémie při sepsi a septikopyémii může být krátkodobá i dlouhodobá.
Postinfekční imunita existuje, je způsoben jak humorálními, tak buněčnými faktory. Důležitou roli v něm hrají antitoxiny, antimikrobiální protilátky, protilátky proti enzymům, ale i T-lymfocyty a fagocyty. Intenzita a trvání imunity proti stafylokokům nebyly dostatečně studovány, protože jejich antigenní struktura je příliš různorodá a neexistuje zkřížená imunita.
Laboratorní diagnostika. Hlavní metoda je bakteriologická; vyvinula a zavedla sérologické testy. V případě potřeby (při intoxikaci) se použije biologický vzorek. Materiálem pro bakteriologický výzkum je krev, hnis, hlen z krku, nosu, výtok z ran, sputum (se stafylokokovým zápalem plic), stolice (se stafylokokovou kolitidou), v případě otravy jídlem - zvratky, stolice, výplachy žaludku, podezřelá jídla . Materiál se naočkuje na krevní agar (hemolýza), na agar mléko-sůl (mléko-žloutek-sůl) (vlivem NaCl je inhibován růst cizorodých bakterií, lépe se detekuje pigment a lecitináza). Izolovaná kultura je identifikována podle druhových charakteristik, je stanovena přítomnost hlavních znaků a faktorů patogenity (zlatý pigment, mannitolová fermentace, hemolýza, plazmatická koaguláza), je zkontrolována citlivost na antibiotika, v případě potřeby je provedena fágová typizace. Ze sérologických reakcí se RPHA a IFM používají k diagnostice purulentně-septických onemocnění, zejména ke stanovení protilátek proti kyselině teichoové nebo proti druhově specifickým antigenům.
Pro stanovení enterotoxigenity stafylokoků se používají tři metody:
1) sérologické - pomocí specifických antitoxických sér v precipitační reakci v gelu je detekován enterotoxin a stanoven jeho typ;
2) biologické - nitrožilní podání kultivačního filtrátu stafylokokové bujónu kočkám v dávce 2 - 3 ml na 1 kg ž. Toxiny způsobují u koček zvracení a průjem;
3) nepřímá bakteriologická metoda - izolace čisté kultury stafylokoka z podezřelého produktu a stanovení faktorů jeho patogenity (vznik enterotoxinu koreluje s přítomností dalších patogenních faktorů, zejména RNAázy).
Nejjednodušší a nejcitlivější je sérologická metoda průkazu enterotoxinu.
Léčba. K léčbě stafylokokových onemocnění se používají především beta-laktamová antibiotika, na která je třeba především zjistit citlivost. U těžkých a chronických stafylokokových infekcí má pozitivní efekt specifická terapie - použití autovakcíny, toxoidu, antistafylokokového imunoglobulinu (lidského), antistafylokokové plazmy.
Specifická profylaxe. K vytvoření umělé imunity proti stafylokokové infekci se používá stafylokokový toxoid (tekutý i tabletovaný), ale antitoxickou imunitu vytváří pouze proti stafylokokům, lýzovaným především fágy skupiny I. Použití vakcín z usmrcených stafylokoků nebo jejich antigenů sice vede ke vzniku antimikrobiálních protilátek, ale pouze proti těm sérovariantám, ze kterých je vakcína vyrobena. Problém nalezení vysoce imunogenní vakcíny účinné proti mnoha typům patogenních stafylokoků je jedním z nejdůležitějších problémů moderní mikrobiologie.
STYLAB nabízí testovací systémy pro analýzu obsahu Staphylococcus aureus v potravinách a životním prostředí mikrobiologickými metodami a také pro stanovení DNA této bakterie pomocí PCR.
Staphylococcus aureus ( Staphylococcusaureus) je všudypřítomná grampozitivní imobilní fakultativně anaerobní nesporotvorná bakterie patřící mezi koky - globulární bakterie. Tento mikroorganismus je součástí normální mikroflóry kůže a sliznic u 15–50 % zdravých lidí a zvířat.
Některé kmeny této bakterie jsou odolné vůči. Nejznámější z nich je methicilin-rezistentní Staphylococcus aureus (MRSA). Dlouhou dobu byl považován za původce nozokomiálních nákaz, ale od poloviny 90. let se ví o onemocněních lidí, kteří nebyli v nemocnicích. Nejčastěji se jednalo o hnisavé kožní léze, nicméně při škrábání lézí se MRSA dostala do krevního oběhu a postihla další orgány. Methicilin-rezistentní Staphylococcus aureus byl citlivý na vankomycin, toxické antibiotikum, které přesto organismus eradikuje.
Další bakterií rezistentní na antibiotika je Staphylococcus aureus (VRSA) rezistentní na vankomycin. Lékaři a vědci tento organismus očekávali od chvíle, kdy se dozvěděli o existenci MRSA a vankomycin-rezistentního enterokoka (VRE), nepatogenního organismu, který žije ve střevech, protože horizontální přenos umožnil výměnu genů mezi těmito bakteriemi. VRSA byla poprvé objevena v roce 2002 a skutečně byla odolná vůči všem účinným antibiotikům, která v té době existovala. Jeho slabou stránkou však byla citlivost na starý sulfonamid – bactrim.
Staphylococcus aureus se vyskytuje v půdě a vodě, často kontaminuje potraviny a může infikovat všechny tkáně a orgány: kůži, podkoží, plíce, centrální nervový systém, kosti a klouby atd. Tato bakterie může způsobit sepsi, hnisavé kožní léze a infekce ran.
Optimální teplota pro Staphylococcus aureus je 30-37 °C. Vydrží zahřívání až na 70-80 ° C po dobu 20-30 minut, suché teplo - až 2 hodiny. Tato bakterie je odolná proti vysychání a zasolování a je schopna růst na médiích s 5-10% obsahem kuchyňské soli, včetně rybího a masového balyku a dalších produktů. Většina dezinfekčních prostředků zabíjí zlatého stafylokoka.
Staphylococcus aureus vylučuje širokou škálu toxinů. Membranotoxiny (hemolyziny) čtyř typů zajišťují hemolýzu, navíc membranotoxin α v experimentech způsobuje nekrózu kůže a při nitrožilní aplikaci smrt zvířat. Exfoliatiny dvou typů poškozují kožní buňky. Leukocidin (Panton-Valentinův toxin) způsobuje poruchy rovnováhy voda-elektrolyt v buňkách leukocytů, zejména makrofágů, neutrofilů a monocytů, což vede k jejich smrti.
V souladu s TR CU 021/2011 a dalšími dokumenty je obsah koaguláza-pozitivních stafylokoků omezen i v potravinách. Jedná se o bakterie, které produkují koagulázu, enzym, který způsobuje srážení krevní plazmy. Navíc S. aureus Tyto zahrnují S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae, S. pseudintermedius a S. schleiferi poddruh. koagulans... Podle některých zpráv S. leei je také koagusálně pozitivní.
Ke stanovení Staphylococcus aureus ve vzorcích se používají jak mikrobiologické metody včetně selektivních médií, tak analýza DNA metodou PCR.
